METHOD FOR ENHANCING CONTINUOUS PRODUCTION OF A NATURAL COMPOUND DURING EXPONENTIAL GROWTH PHASE AND STATIONARY PHASE OF A MICROORGANISM

• Main Authors: KUNTE, Hans Jörg, BILSTEIN, Andreas, ALFARO ESPINOZA, Gabriela
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 06.09.2019
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIREDCHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERSFROM A RACEMIC MIXTURE; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

A method for increased and permanent production of a natural compound by a microorganism during an exponential growth and during a stationary phase of a culture of the microorganism, the method comprising: enhancing a translation of a target mRNA, wherein the target mRNA comprises a transcript of a target gene, wherein the target gene is encoding the natural compound or a key enzyme involved in a biosynthesis of the natural compound in the microorganism, by replacing a wild type (wt) ribosome binding site (RBS) upstream of the target gene with a synthetic RBS, the synthetic RBS possessing a higher affinity towards a 16S rRNA of a ribosome of the microorganism than the wt RBS; and enhancing a transcription of the target gene by converting an osmotically regulated σ38 promoter upstream of the target gene into a stationary σ38 promoter, wherein the osmotically regulated σ38 promoter comprises a -35 G-element and a -10 element which are separated from each other by a spacer sequence, by deleting the -35 G element. L'invention concerne un procédé de production amélioré et permanent d'un composé naturel par un micro-organisme pendant une phase de croissance exponentielle et une phase stationnaire d'une culture du micro-organisme, le procédé comprenant : l'amélioration d'une traduction d'un ARNm cible, l'ARNm cible comprenant un transcrit d'un gène cible, le gène cible codant pour le composé naturel ou une enzyme clé impliquée dans une biosynthèse du composé naturel dans le micro-organisme, par remplacement d'un site de liaison ribosomique (SLR) de type sauvage en amont du gène cible par un SLR synthétique, le SLR synthétique possédant une affinité supérieure vis-à-vis d'un ARNr 16S d'un ribosome du micro-organisme que le SLR de type sauvage ; et l'amélioration d'une transcription du gène cible par conversion d'un promoteur σ38 à régulation osmotique en amont du gène cible en un promoteur σ38 stationnaire, le promoteur σ38 à régulation osmotique comprenant un élément -35 G et un élément -10 qui sont séparés l'un de l'autre par une séquence d'espacement, par suppression de l'élément -35 G.