METHODS AND KITS FOR ASSAYING ENDOGLYCOSIDASE ACTIVITY

• Main Authors: WU, Zhengliang L, ETHEN, Cheryl M, HUANG, Xinyi
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 12.04.2018
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; ENZYMOLOGY; INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIRCHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES; MEASURING; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PHYSICS; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; SPIRITS; TESTING; VINEGAR; WINE

A method for assaying endoglycosidase activity includes providing a proteoglycan having a glycosaminoglycan chain with a non-reducing end; treating the proteoglycan with a glycosyltransferase to incorporate a carbohydrate into the non-reducing end of the glycosaminoglycan chain, wherein the carbohydrate includes a click chemistry moiety; adding a label to the proteoglycan, wherein the label includes a click chemistry moiety that reacts to the click chemistry moiety of the carbohydrate such that the label attaches to the carbohydrate to form a labeled proteoglycan; immobilizing the labeled proteoglycan on a multi-well plate, wherein the multi-well plate includes a specific anti-proteoglycan antibody for binding the labeled proteoglycan; treating the labeled proteoglycan with an endoglycosidase specific to the glycosaminoglycan chain; and detecting the labeled proteoglycan. L'invention concerne un procédé de dosage d'une activité d'endoglycosidase consistant : à produire un protéoglycane présentant une chaîne de glycosaminoglycane avec une extrémité non réductrice ; à traiter le protéoglycane avec une glycosyltransférase en vue d'incorporer un glucide dans l'extrémité non réductrice de la chaîne de glycosaminoglycane, le glucide comprenant une fraction de chimie click ; à ajouter un marqueur au protéoglycane, le marqueur comprenant une fraction de chimie click qui réagit à la fraction de chimie click du glucide de sorte que le marqueur se fixe au glucide en vue de former un protéoglycane marqué ; à immobiliser le protéoglycane marqué sur une plaque multipuits, la plaque multipuits comprenant un anticorps anti-protéoglycane spécifique destiné à lier le protéoglycane marqué ; à traiter le protéoglycane marqué avec une endoglycosidase spécifique de la chaîne de glycosaminoglycane ; et à détecter le protéoglycane marqué.