MULTI-ITEM AMPLIFICATION METHOD

• Main Authors: KURATA, Shinya, YAMAGUCHI, Masahiro
• Format: Patent
• Language: English; French; Japanese
• Published: 26.10.2017
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; COMPOSITIONS THEREOF; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

Provided is a technique for efficiently and uniformly adding an artificial nucleic acid sequence required for measurement, when a plurality of genes are mainly targeted using a next-generation sequencer. This method is for simultaneously amplifying a plurality of target nucleic acid groups using a primer set including: a primer pair group X including at least one primer pair formed of a forward primer (a) having a sequence complementary to a target nucleic acid on the 3'-end side, and having, on the upstream side thereof, all of or a partial sequence on the 3'-end side of an artificial nucleic acid sequence A, and a reverse primer (b) having a sequence complementary to the target nucleic acid on the 3'-end side, and having, on the upstream side thereof, all of or a partial sequence on the 3'-end side of an artificial nucleic acid sequence B; a primer pair Y formed of a forward primer (c) having the artificial nucleic acid sequence A on the 3'-end side, and an artificial nucleic acid sequence C on the 5'-end side, and a reverse primer (d) having the artificial nucleic acid sequence B on the 3'-end side, and an artificial nucleic acid sequence D on the 5'-end side; and a primer pair Z formed of a forward primer (e) having all or a portion of the artificial nucleic acid sequence C, and a reverse primer (f) having all or a portion of the artificial nucleic acid sequence D. L'invention concerne une technique permettant d'ajouter de manière efficace et uniforme une séquence d'acide nucléique artificielle nécessaire pour une mesure, lorsqu'une pluralité de gènes sont principalement ciblés à l'aide d'un séquenceur de nouvelle génération. Ce procédé est destiné à amplifier simultanément une pluralité de groupes d'acides nucléiques cibles à l'aide d'un ensemble d'amorces comprenant : un groupe X de paires d'amorces comprenant au moins une paire d'amorces formée d'une amorce sens (a) comprenant une séquence complémentaire d'un acide nucléique cible du côté de l'extrémité 3', et comprenant, du côté amont associé, la séquence entière ou une séquence partielle du côté de l'extrémité 3' d'une séquence d'acide nucléique artificielle A, et d'une amorce antisens (b) comprenant une séquence complémentaire de l'acide nucléique cible du côté de l'extrémité 3', et comprenant, du côté amont associé, la séquence entière ou une séquence partielle du côté de l'extrémité 3' d'une séquence d'acide nucléique artificielle B; une paire Y d'amorces formée d'une amorce sens (c) comprenant la séquence d'acide nucléique artificielle A du côté de l'extrémité 3', et une séquence d'acide nucléique artificielle C du côté de l'extrémité 5', et d'une amorce antisens (d) comprenant la séquence d'acide nucléique artificielle B du côté de l'extrémité 3', et une séquence d'acide nucléique artificielle D du côté de l'extrémité 5'; et une paire Z d'amorces formée d'une amorce sens (e) comprenant la séquence entière ou une partie de la séquence d'acide nucléique artificielle C, et d'une amorce antisens (f) comprenant la séquence entière ou une partie de la séquence d'acide nucléique artificielle D. 次世代シーケンサーを用いて主に複数の遺伝子を標的とする場合において、測定に必要な人工核酸配列を効率よく均一に付加するための技術を提供する。　3'末端側に標的核酸に相補的な配列を持ち、その上流側に人工核酸配列Aの全部あるいは3'末端側の一部の配列を持つフォワードプライマー(a)と、3'末端側に標的核酸に相補的な配列を持ち、その上流側に人工核酸配列Bの全部あるいは3'末端側の一部の配列を持つリバースプライマー(b)からなるプライマー対を、少なくとも1対以上含むプライマー対群Xおよび、3'末端側に人工核酸配列Aを持ち、5'末端側に人工核酸配列Cを持つフォワードプライマー(c)と、3'末端側に人工核酸配列Bを持ち、5'末端側に人工核酸配列Dを持つリバースプライマー(d)からなるプライマー対Yおよび、人工核酸配列Cの全部あるいは一部の配列を持つフォワードプライマー(e)と、人工核酸配列Dの全部あるいは一部の配列を持つリバースプライマー(f)からなるプライマー対Zにより構成されるプライマーセットを用いて複数の標的核酸群を同時に増幅する方法。