DESIGNER RIBOSOMES AND METHODS OF USE THEREOF FOR INCORPORATING NON-STANDARD AMINO ACIDS INTO POLYPEPTIDES

• Main Authors: CZEKSTER, Clarissa Melo, ROBERTSON, Wesley E, SHRADER, Alanna Schepartz
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 21.09.2017
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

Engineered 23S rRNAs and methods so of use thereof for translation of proteins incorporating non-standard amino acids are provided. Typically, the 23S rRNA includes one or more mutations at positions 2496-2507 relative to E. coli wildtype 23S rRNA, wherein a ribosome composed of the 23S rRNA can catalyze the covalent transfer of a non-standard amino acid from an aminoacyl-RNA onto a nascent peptide chain. For example, the 23S rRNA can include the sequence UGACUU at positions 2502-2507 relative to E. coli wildtype 23S rRNA, and optionally the sequence AGCGUGA from positions 2057-2063 relative to E. coli wildtype 23S rRNA. The 23S rRNA can include additional or alternative deletions, substitutions, insertions, or combination thereof. The compositions and methods can be used to make polypeptides and sequence defined polymers. L'invention concerne des ARNr 23S modifiés et des procédés d'utilisation de ces derniers destinés à la traduction de protéines incorporant des acides aminés non standard. Généralement, l'ARNr 23S comprend une ou plusieurs mutations aux positions 2496 à 2507 par rapport à l'ARNr 23S de type sauvage d'E. coli, un ribosome composé de l'ARNr 23S pouvant catalyser le transfert covalent d'un acide aminé non standard à partir d'un aminoacyl-ARN sur une chaîne peptidique naissante. Par exemple, l'ARNr 23S peut comprendre la séquence UGACUU aux positions 2502 à 2507 par rapport à l'ARNr 23S de type sauvage d'E. coli, et éventuellement, la séquence AGCGUGA à partir des positions 2057 à 2063 par rapport à l'ARNr 23S de type sauvage d'E. coli. L'ARNr 23S peut comprendre des délétions, des substitutions, des insertions supplémentaires ou alternatives, ou une combinaison de ces dernières. Ces compositions et ces procédés peuvent être utilisés pour préparer des polypeptides et des polymères à séquence définie.