MICROORGANISM DETECTION METHOD AND MICROORGANISM DETECTION KIT

• Main Author: SOEJIMA, Takashi
• Format: Patent
• Language: English; French; Japanese
• Published: 19.01.2017
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; COMPOSITIONS THEREOF; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS; TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE; TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINSTCLIMATE CHANGE; VINEGAR; WINE

According to the present invention, viable cells of microorganisms in a test sample are detected and distinguished from dead cells and/or damaged cells using the steps below: a) a step of adding, to the test sample, an agent that selectively inhibits, in dead cells, the amplification of nucleic acids of the microorganisms by means of a nucleic acid amplification method, b) a step of carrying out processing to increase the permeability of the cells of the microorganisms, c) a step of amplifying, by means of an isothermal nucleic acid amplification method that uses a strand-displacement nucleic acid elongase, nucleic acid target regions of the microorganisms in the test sample without extracting nucleic acids from the cells, and d) a step of analyzing the amplification product. La présente invention concerne des cellules viables de micro-organismes dans un échantillon test, détectées et différenciées de cellules mortes ou de cellules endommagées au moyen des étapes ci-dessous : a) une étape consistant à ajouter, à l'échantillon test un agent qui inhibe sélectivement, dans les cellules mortes, l'amplification d'acides nucléiques des micro-organismes au moyen d'un procédé d'amplification d'acide nucléique ; b) une étape consistant à effectuer un traitement pour augmenter la perméabilité des cellules des micro-organismes ; c) une étape d'amplification, au moyen d'un procédé d'amplification d'acide nucléique isothermique utilisant une élongase d'acide nucléique de déplacement de brin, des régions cibles d'acide nucléique des micro-organismes dans l'échantillon test sans extraire les acides nucléiques des cellules ; et d) une étape d'analyse du produit d'amplification. 下記工程により、被検試料中の微生物の生細胞を、死細胞及び／又は損傷細胞と識別して検出する： ａ）前記被検試料に、微生物の核酸の核酸増幅法による増幅を、死細胞に選択的に阻害する薬剤を添加する工程、 ｂ）微生物の細胞の透過性を高める処理を行う工程、 ｃ）被検試料中の微生物の核酸のターゲット領域を、細胞からの核酸の抽出を行わずに、鎖置換型核酸伸長酵素を用いた等温核酸増幅法により増幅する工程、及び ｄ）増幅産物を解析する工程。