METHOD FOR PRODUCING NAÏVE PLURIPOTENT STEM CELLS

• Main Authors: OKANO, Hideyuki, SHIOZAWA, Seiji, KISA, Fumihiko
• Format: Patent
• Language: English; French; Japanese
• Published: 22.09.2016
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The problem is to produce and/or maintain naïve pluripotent stem cells capable of high expression of genes important to maintain an undifferentiated state, which could not be achieved by known methods for producing pluripotent stem cells. The problem of the invention can be solved because the invention makes it possible to produce naïve pluripotent stem cells capable of maintaining an undifferentiated state by introducing six genes (Oct3/4, Klf4, c-Myc, Sox2, Nanog, and Klf2) among the so-called reprogramming factors, inducing transient expression as a characteristic feature, and performing culturing in medium containing LIF, MEK inhibitor, GSK3 inhibitor, cAMP production promoter, TGF-β inhibitor, and PKC inhibitor. Le problème abordé par l'invention est de produire et/ou de maintenir des cellules souches pluripotentes naïves capables d'une expression élevée des gènes importants pour maintenir un état indifférencié, qui n'a pas pu être obtenu par des procédés connus pour la production de cellules souches pluripotentes. La solution selon l'invention porte sur la production de cellules souches pluripotentes naïves capables de maintenir un état indifférencié par introduction de six gènes (Oct3/4, Klf4, c-Myc, Sox2, Nanog, et Klf2) parmi lesdits facteurs de reprogrammation, pour induire une expression transitoire à titre de trait caractéristique, et la mise en œuvre de la culture dans un milieu contenant LIF, un inhibiteur de MEK, un inhibiteur de GSK3, le promoteur de production d'AMPc, un inhibiteur de TGF-β, et un inhibiteur de PKC. 　公知の多能性幹細胞の製造方法では達成できなかった、未分化能維持に重要な遺伝子を高発現できるナイーブ型の多能性幹細胞を製造および／または維持することにある。　本発明によれば、いわゆる初期化因子のうち、６種の遺伝子（Ｏｃｔ３／４、Ｋｌｆ４、ｃ－Ｍｙｃ、Ｓｏｘ２、ＮａｎｏｇおよびＫｌｆ２）を導入して、一時的に発現させることを特徴とし、さらにＬＩＦ、ＭＥＫ阻害剤、ＧＳＫ３阻害剤、ｃＡＭＰ産生促進剤、ＴＧＦ－β阻害剤およびＰＫＣ阻害剤を含む培地で培養することにより、未分化能を維持できるナイーブ型の多能性幹細胞を製造することができるため、本発明の課題を解決することができる。