CMP-DEPENDENT SIALIDASE ACTIVITY

• Main Authors: SOBEK, HARALD, THOMANN, MARCO, GREIF, MICHAEL, MALIK, SEBASTIAN
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 30.06.2016
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIREDCHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERSFROM A RACEMIC MIXTURE; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The present disclosure is directed to the properties of certain glycosyltransferase variants having N-terminal truncation deletions or internal deletions. Any of the mutants disclosed in here exhibit α-2,6-sialyltransferase enzymatic activity in the presence of CMP-activated sialic acid as co-substrate, and in the presence of a suitable acceptor site. A fundamental finding documented in the present disclosure is that suchs enzyme are not only capable of catalyzing transfer of a sialidyl moiety but they are also capable of catalyzing hydrolytic cleavage of terminally bound sialic acid from a glycan. Particularly it was found that in the presence of cytidine 5'-monophosphate (CMP) glycosyltransferase activity is inhibited, and sialidase activity is stimulated. Sialidase activity was found to be dependent on the presence of a particular stretch of amino acids (position 90 to 108) in the polypeptide sequence of the reference (wildtype) hST6Gal-I polypeptide. Deletion of this sequence portion in an N-terminal truncation variant was found to abolish sialidase activity, notably both in the presence and in the absence of CMP. Thus, disclosed are compositions, uses and methods employing the CMP-mediated feed-back regulation documented herein. La présente divulgation concerne les propriétés de certains variants de glycosyltranférase portant des délétions de type troncature N-terminale ou des délétions internes. L'un quelconque des mutants ci-décrits présente une activité enzymatique α-2,6-sialyltransférase en présence d'acide sialique activé par CMP à titre de co-substrat, et en présence d'un site accepteur convenable. Une découverte fondamentale documentée dans la présente divulgation est que ces enzymes sont non seulement capables de catalyser le transfert d'un fragment sialidyle mais aussi capables de catalyser le clivage hydrolytique de l'acide sialique à liaisons terminales d'un glycane. En particulier, on a découvert qu'en présence de cytidine 5'-monophosphate (CMP), l'activité glycosyltransférase est inhibée, et l'activité sialidase stimulée. L'activité sialidase s'est avérée dépendante de la présence d'une extension d'acides aminés particulière (position 90 à 108) dans la séquence polypeptidique du polypeptide hST6Gal-I de référence (type sauvage). La délétion de cette portion de séquence dans un variant à troncature N-terminale s'est avérée abolir l'activité sialidase, notamment, à la fois en présence et en l'absence de CMP. Des compositions, des utilisations et des procédés utilisant la rétrorégulation à médiation CMP ci-documentée sont en outre décrits.