METHOD OF MAKING A BENZYLISOQUINOLINE ALKALOID (BIA) METABOLITE, ENZYMES THEREFORE

• Main Authors: FOSSATI, ELENA, MARTIN, VINCENT, ZHU, YUN, EKINS, ANDREW, NARCROSS, LAUREN
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 16.07.2015
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIREDCHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERSFROM A RACEMIC MIXTURE; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

There is provided a method of preparing a benzylisoquinoline alkaloid (BIA) metabolite comprising: a. culturing a host cell under conditions suitable for protein production, including a pH of between about 7 and about 10 said host cell comprising: b. a first heterologous coding sequence encoding a first enzyme involved in a metabolite pathway that converts (R,S)-norlaudanosoline into the metabolite; c. a second heterologous coding sequence encoding a second enzyme involved in a metabolite pathway that converts (R,S)-norlaudanosoline into the metabolite; d. a third heterologous coding sequence encoding a second enzyme involved in a metabolite pathway that converts (R,S)-norlaudanosoline into the metabolite; (d) adding (R,S)-norlaudanosoline to the cell culture; and recovering the metabolite from the cell culture L'invention se rapporte à un procédé de préparation d'un métabolite alcaloïde benzylisoquinoléine (BIA), comprenant : a. la culture d'une cellule hôte dans des conditions appropriées pour la production de protéines, notamment à un pH compris entre environ 7 et environ 10, ladite cellule hôte comprenant : b. une première séquence codante hétérologue codant pour une première enzyme mise en jeu dans une voie métabolique qui convertit la (R,S)-norlaudanosoline en le métabolite; c. une deuxième séquence codante hétérologue codant pour une seconde enzyme mise en jeu dans une voie métabolique qui convertit la (R,S)-norlaudanosoline en le métabolite; d. une troisième séquence codante hétérologue codant pour une seconde enzyme mise en jeu dans une voie métabolique qui convertit la (R,S)-norlaudanosoline en le métabolite; (d) l'ajout de (R,S)-norlaudanosoline à la culture cellulaire; et la récupération du métabolite à partir de la culture cellulaire.