NUCLEIC ACID DETECTION AND QUANTIFICATION

• Main Authors: FANG, NAN, MISSEL, ANDREAS, WEDLER, HOLGER, HEITZ, KATJA
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 18.06.2015
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; ENZYMOLOGY; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The present invention relates to methods and uses for the detection or quantification of newly-synthesized double-stranded target nucleic acid molecules in a sample during quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) amplification. According to the invention, an intercalating dye recognizing double-stranded DNA molecules with higher affinity than single-stranded DNA molecules and a fluorophore-labeled oligonucleotide-probe being sequence specific for a target nucleic acid molecule are simultaneously employed, thus enabling quantification a specific target and total amount of a mixed nucleic acid population, and enabling assessing the cause of suboptimal PCR performance. La présente invention concerne des procédés et des utilisations permettant la détection ou la quantification de molécules d'acides nucléiques cibles double brin qui viennent d'être synthétisées dans un échantillon pendant une amplification par PCR quantitative (qPCR) en temps réel. Selon l'invention, un colorant intercalant qui reconnaît les molécules ADN double brin à une affinité plus élevée que les molécules ADN simple brin et une sonde oligonucléotidique marquée par un fluorophore qui est une séquence spécifique d'une molécule d'acide nucléique cible sont simultanément utilisés, permettant ainsi la quantification d'une cible spécifique et de la quantité totale d'une population d'acides nucléiques mixte, et permettant l'évaluation de la cause d'une performance suboptimale de la PCR.