METHOD OF PRODUCING PANCREATIC HORMONE-PRODUCING CELLS

• Main Authors: SHOJI, MASANOBU, HOSOYA, MASAKI
• Format: Patent
• Language: English; French; Japanese
• Published: 16.02.2012
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; COMPOSITIONS THEREOF; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; HUMAN NECESSITIES; HYGIENE; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS ORMEDICINAL PREPARATIONS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The purpose of the present invention is to provide a method of producing pancreatic hormone-producing cells that have a form more similar to that of normally developed pancreatic cells from stem cells. The method of producing pancreatic hormone-producing cells is characterized by subjecting stem cells to the following steps (1)-(6): (1) a step for culturing stem cells in a culture medium that includes a Rho kinase inhibitor; (2) a step for culturing the cells obtained in step (1) in a culture medium including a GSK3 inhibitor; (3) a step for culturing the cells obtained in step (2) in a culture medium including a GSK3 inhibitor and an agent that activates activin receptor-like kinases 4 and 7; (4) a step for forming a cell aggregate of the cells obtained in step (3) and culturing said cell aggregate in a floating state within a culture medium; (5) a step for culturing the cells obtained in step (4) in a culture medium including a retinoic acid receptor agonist, an AMP-activated protein kinase and/or an activin receptor-like kinase 2, 3 and 6 inhibitor, an activin receptor-like kinase 4, 5 and 7 inhibitor and a cell growth factor; and (6) a step for culturing the cells obtained in step (5) in a culture medium. La présente invention concerne un procédé de production de cellules produisant une hormone pancréatique qui ont une forme plus semblable à celle de cellules pancréatiques qui se développent normalement à partir de cellules souches. Le procédé de production de cellules produisant une hormone pancréatique se caractérise par le fait de soumettre les cellules souches aux étapes suivantes (1)-(6) : (1) une étape de culture des cellules souches dans un milieu de culture qui contient un inhibiteur de Rho kinase ; (2) une étape de culture des cellules obtenues dans l'étape (1) dans un milieu de culture contenant un inhibiteur de GSK3 ; (3) une étape de culture des cellules obtenues dans l'étape (2) dans un milieu de culture contenant un inhibiteur de GSK3 et un agent qui active les kinases 4 et 7 de type récepteur d'activine ; (4) une étape de formation d'un agrégat cellulaire composé des cellules obtenues dans l'étape (3) et de culture dudit agrégat cellulaire dans un état flottant dans un milieu de culture ; (5) une étape de culture des cellules obtenues dans l'étape (4) dans un milieu de culture contenant un agoniste de récepteur d'acide rétinoïque, une protéine kinase activée par l'AMP et/ou un inhibiteur de kinase 2, 3 et 6 de type récepteur d'activine, un inhibiteur de kinase 4, 5 et 7 de type récepteur d'activine et un facteur de croissance cellulaire ; et (6) une étape de culture des cellules obtenues dans l'étape (5) dans un milieu de culture.