EPIGENETIC ANALYSIS

• Main Authors: MOLLOY, PETER LAURENCE, ROSS, JASON PETER
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 19.05.2011
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; ENZYMOLOGY; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

Provided herein are methods for the analysis of methylation in nucleic acid molecules, comprising bisulfite conversion and subsequent copying or amplification in the presence of a ligand-labelled dCTP or a ligand-labelled dGTP incorporated at the site of a cytosine or complementary guanine, respectively, at positions corresponding to methylated cytosines in the bisulfite-treated nucleic acid or after the copying or amplification, subjecting the resulting nucleic acid molecules to restriction endonuclease digestion with an enzyme which comprises a cytosine nucleotide in its target recognition sequence to generate nucleic acid fragments with termini proximal or adjacent to one or more cytosines and attaching a ligand or oligonucleotide adaptor and subsequently amplifying the nucleic acid molecules. La présente invention a pour objet des procédés pour l'analyse de méthylation dans des molécules d'acide nucléique, comprenant une conversion au bisulfite et une copie ou une amplification ultérieure en présence d'un dCTP marqué par un ligand ou d'un dGTP marqué par un ligand incorporé sur le site d'une cytosine ou d'une guanine complémentaire, respectivement, en des positions correspondant aux cytosines méthylées dans l'acide nucléique traité au bisulfite ou après la copie ou l'amplification, la soumission des molécules d'acide nucléique résultantes à une digestion par endonucléase de restriction à l'aide d'une enzyme qui comprend un nucléotide de cytosine dans sa séquence de reconnaissance cible pour produire des fragments d'acide nucléique ayant des terminaisons proximales ou adjacentes à une ou plusieurs cytosines et la fixation d'un ligand ou d'un adaptateur d'oligonucléotide et l'amplification ultérieure des molécules d'acide nucléique.