THERMOSTABLE 1,5-ANHYDROGLUCITOL DEHYDROGENASE, AND METHOD FOR MEASUREMENT OF 1,5-ANHYDROGLUCITOL BY USING THE SAME

• Main Authors: MACHIDA REIKO, YOSHIOKA HIDEKI, YABUUTI MASAHIKO, TSUKAMOTO SHUHEI, MASUDA MINORU, UMEGAE YOSHIHIKO
• Format: Patent
• Language: English; French; Japanese
• Published: 23.12.2009
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; COMPOSITIONS THEREOF; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The protein (1) or (2) shown below can act specifically on 1,5-anhydroglucitol (1,5-AG), and has thermal stability and therefore exhibits excellent storage stability.  Thus, the protein is an extremely useful enzyme for the commercialization of a quantification reagent or an enzyme sensor for 1,5-AG to achieve the convenient and practical 1,5-AG measurement. (1) A protein comprising an amino acid sequence having at least one mutation selected from a Gly-4 to Ala mutation, a Glu-6 to His mutation, a Ser-14 to Thr mutation, an Ala-37 to Thr or Arg mutation, a Pro-50 to Gln mutation, a Glu-67 to Gly mutation, an Asp-80 to Tyr mutation, a Val-93 to Met mutation, an Arg-156 to Pro mutation, a Leu-164 to Met mutation, an Asn-202 to Asp mutation, a Thr-235 to Ala mutation, an Asn-348 to Tyr mutation, a Gly-362 to Arg mutation and a Val-473 to Ala mutation in the amino acid sequence depicted in SEQ ID NO:4. (2) A thermostable protein which comprises an amino acid sequence having the addition, deletion or substitution of one to several amino acid residues other than the mutated amino acid residue(s) in the amino acid sequence having at least one mutation as mentioned in item (1) above, and which has an 1,5-anhydroglucitol dehydrogenase activity. La protéine (1) ou (2) présentée ci-après peut agir spécifiquement sur le 1,5-anhydroglucitol (1,5-AG) et possède une stabilité thermique et, par conséquent, présente une excellente stabilité au stockage. Ainsi, la protéine est une enzyme extrêmement utile pour la commercialisation d'un réactif de quantification ou un détecteur d'enzyme pour le 1,5-AG pour parvenir à la mesure de 1,5-AG commode et pratique. (1) Une protéine comprenant une séquence d'acides aminés ayant au moins une mutation choisie parmi une mutation Gly- à Ala, une mutation Glu-6 à His, une mutation Ser-14 à Thr, une mutation Ala-37 à Thr ou Arg, une mutation Pro-50 à Gln, une mutation Glu-67 à Gly, une mutation Asp-80 à Tyr, une mutation Val-93 à Met, une mutation Arg-156 à Pro, une mutation Leu-164 à Met, une mutation Asn-202 à Asp, une mutation Thr-235 à Ala, une mutation Asn-348 à Tyr, une mutation Gly-362 à Arg et une mutation Val-473 à Ala dans la séquence d'acides aminés représentée dans SEQ ID NO:4. (2) Une protéine thermostable qui comprend une séquence d'acides aminés présentant l'addition, la délétion ou la substitution d'un à plusieurs restes d'acides aminés autres que le ou les restes d'acides aminés mutés dans la séquence d'acides aminés ayant au moins une mutation telle que mentionnée au point (1) ci-dessus et qui a une activité 1,5-anhydroglucitol déshydrogénase.