PEPINO MOSAIC VIRUS DETECTION METHOD

• Main Authors: GARCIA RANDEZ, ANA, CORDOBA SELLES, CARMEN, JORDA GUTIERREZ, MARIA CONCEPTION, CEBRIAN MICO, MARIA DEL CARMEN, PALLAS BENET, VICENTE, SANCHEZ NAVARRO, JESUS ANGEL, ALFARO FERNANDEZ, ANA
• Format: Patent
• Language: English; French; Spanish
• Published: 09.07.2009
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; DERIVATIVES THEREOF; ENZYMOLOGY; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; NUCLEIC ACIDS; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; ORGANIC CHEMISTRY; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; SPIRITS; SUGARS; VINEGAR; WINE

The invention relates to a method for detecting and identifying PepMV isolates in a plant sample, comprising the following steps: (a) extraction of total RNA from the plant sample; (b) analysis of the RNA extracted in step (a) by means of a one-step RT-PCR amplification reaction, said reaction including a mixture containing an oligonucleotide having sequence SEQ ID No1 and an oligonucleotide selected from among the oligonucleotides having sequences SEQ ID No2, SEQ ID No3 and SEQ ID No4 and combinations thereof; (c) identification of the amplification products obtained in step (b); (d) digestion with restriction enzymes of the amplification products identified in step (c); and (e) identification of the products of the digestion in step (d). The invention also relates to a kit for carrying out the aforementioned method. La presente invención se refiere a un método para Ia detección e identificación de aislados del PepMV en una muestra vegetal, basado en las siguientes etapas: a) extracción del ARN total de Ia muestra vegetal; b) análisis del ARN extraído en a) mediante una reacción de amplificación RT-PCR en un solo paso incluyendo en Ia reacción una mezcla que comprende un oligonucleótido de secuencia SEQ ID No1 y un oligonucleótido seleccionado entre los oligonucleótidos de secuencia SEQ ID No2, SEQ ID No3, SEQ ID No4 y sus combinaciones; c) identificación de los productos de amplificación obtenidos en b); d) digestión con enzimas de restricción de los productos de amplificación identificados en c); y e) identificación de los productos de Ia digestión realizada en d). Asimismo, se contempla un kit para llevar a cabo el método descrito. La présente invention concerne un procédé de détection et d'identification des isolats du PepMV dans un échantillon végétal, fondé sur les étapes suivantes: (a) extraction de l'ARN total de l'échantillon végétal, (B) analyse de l'ARN extrait à l'étape (a) au moyen d'une réaction d'amplification PCR-RT en une seule passe incluant dans cette réaction un mélange comprenant un oligonucléotide de séquence SEQ ID No 1 et un oligonucléotide sélectionné entre les oligonucléotides de séquence SEQ ID N02, SEQ ID No3, SEQ ID No4 et des combinaisons de ceux-ci, (c) identification des produits d'amplification obtenus à l'étape (b), (d) digestion avec de enzymes de restriction des produits d'amplification identifiés à l'étape (c) et, (e) identification des produits de la digestion réalisée à l'étape (d). L'invention concerne aussi une trousse permettant de mettre en oeuvre le procédé susmentionné.