SPECIFIC ANTIBODY FRAGMENTS FOR THE HUMAN CARCINOEMBRYONIC ANTIGEN (CEA)

• Main Authors: BELL GARCIA, HANSSEL, GAVILONDO COWLEY, JORGE, VICTOR, GONZALEZ LOPEZ, LUIS, JAVIER, AYALA AVILA, MARTA, FREYRE ALMEIDA, FREYA, DE LOS MILAGROS, MONTESINO SEGUI, RAQUEL, ROQUE NAVARRO, LOURDES, TATIANA, CREMATA ALVAREZ, JOSE, ALBERTO, ACEVEDO CASTRO, BORIS, ERNESTO
• Format: Patent
• Language: English; French; Spanish
• Published: 13.11.2003
• Edition: 7
• Subjects: CHEMISTRY; HUMAN NECESSITIES; HYGIENE; MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; METALLURGY; ORGANIC CHEMISTRY; PEPTIDES; PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES

The invention relates to mono- and bivalent (diabody) single-chain Fv-type (scFv) antibody fragments which are obtained using recombinant DNA techniques from the carcinoembryonic anti-antigen (CEA) monoclonal antibody (McA) CB/ior-CEA.1. The aforementioned McA has a high affinity for the CEA and is used in the diagnosis and monitoring of colorectal tumours in humans. As with the original McA, diabody and monovalent scFv fragments exhibit high affinities for the human CEA and recognise an epitope that is dependent on carbohydrate conservation. The diabody and monovalent scFv fragments have affinity constants for the CEA of (5.0 +/- 0.4) x 10 L mol<-1> and (2.8 +/- 0.3) x 10 L mol<-1> respectively. The two aforementioned fragments do not display cross-reactivity with normal human tissues and cells, except for the normal colonic mucosa where the CEA is occasionally present. Said fragments can be produced through expression in recombinant micro-organisms from the cloning of nucleic acid sequences that code for variable regions obtained from the hybridoma that is produced by the CB/ior-CEA.1 McA. As with the original McA, the diabody and the monovalent scFv have a capacity for the in vivo identification in rats of human CEA-producing cells which grow forming tumours. The monovalent scFv and diabody do not posses Fc domains and the molecular sizes of said monovalent scFv and diabody are 5 and 2.5 times, respectively, less than the rat McA. As a result, the aforementioned monovalent scFv and diabody can better penetrate tissues in vivo and are less immunogenic in humans. Fragmentos de anticuerpo tipo Fv de cadena sencilla (scFv) mono y divalente (diacuerpo), obtenidos por técnicas de ADN recombinante a partir del anticuerpo monoclonal (AcM) anti-antígeno carcinoembrionario (CEA) CB/ior-CEA.1. Este AcM tiene muy alta afinidad por el CEA y se emplea en el diagnóstico y seguimiento de tumores colorectales del hombre. Como el AcM original, los fragmentos scFv monovalente y diacuerpo exhiben altas afinidades por el CEA humano y reconocen un epítope dependiente de la conservación de carbohidratos. El fragmento scFv monovalente y diacuerpo tienen constantes de afinidad por el CEA de (5.0 ± 0.4) x 10 L mol<-1> y (2.8 ± 0.3) x 10 L mol<-1>, respectivamente. Estos dos fragmentos no presentan reactividad cruzada con células y tejidos humanos normales, excepto la mucosa colónica normal donde el CEA está ocasionalmente presente. Los fragmentos pueden producirse mediante la expresión en microorganismos recombinantes, a partir del clonaje de secuencias de ácidos nucleicos codificantes para regiones variables obtenidas del hibridoma que produce el AcM CB/ior-CEA.1. Al igual que el AcM original, el scFv monovalente y el diacuerpo tienen la capacidad de identificar in vivo en ratones a células productoras de CEA humano que crecen formando tumores. El scFv monovalente y el diacuerpo tienen un tamaño molecular 5 y 2.5 veces inferior, respectivamente, que el AcM de ratón y no poseen dominios Fc, lo que les confiere el potencial de penetrar mejor los tejidos in vivo y de ser menos inmunogénicos en el hombre. L'invention concerne des fragments d'anticorps du type Fv à chaîne simple (scFv) monovalent et bivalent ( </= BIACORPS >/= ), obtenus par techniques d'ADN recombinant à partir de l'anticorps monoclonal (AcM) anti-antigène carcinoembryonaire (ACE) CB/ior-CEA.1. Cet AcM a une très grande affinité avec l'ACE et s'utilise dans le diagnostic et le suivi de tumeurs colorectales chez l'être humain. Comme l'AcM original, les fragments scFv monovalent et d'anticorps bivalent présentent une affinité très élevée avec l'ACE humain et reconnaissent un épitope dépendant de la conservation d'hydrates de carbone. Le fragment scFv monovalent et l'anticorps bivalent ont des constantes d'affinité avec l'ACE de (5,0 +/- 0,4) x 10 L mol<-1> et (2,8 +/- 0,3) x 10 L mol<-1>, respectivement. Ces deux fragments ne présentent pas de réactivité croisée avec des cellules et des tissus humains normaux, sauf avec la muqueuse du côlon normale où l'ACE est présente occasionnellement. Les fragments peuvent se produire au moyen de l'expression en micro-organismes recombinants, à partir du clonage de séquences d'acides nucléiques codifiantes pour des régions variables obtenues à partir de l'hybridome produit par l'AcM CB/ior-CEA.1. Comme l'AcM original, le scFv monovalent et l'anticorps bivalent peuvent identifier in vivo, chez des rats, des cellules productrices d'ACE humain qui augmentent de taille et forment des tumeurs. Le scFv monovalent et l'anticorps bivalent ont des dimensions moléculaires 5 et 2,5 fois inférieures, respectivement, à l'AcM de rat et ne possèdent pas de Fc, ce qui leur permet de mieux pénétrer dans les tissus in vivo et d'être moins immunogéniques chez l'être humain.