HIGH-SENSITIVITY REAL-TIME POLYMERASE CHAIN REACTION FOR DETECTION OF NUCLEIC ACIDS

• Main Author: KALTENBOECK, BERNHARD
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 08.01.2004
• Edition: 7
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; ENZYMOLOGY; FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIREDCHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERSFROM A RACEMIC MIXTURE; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The invention features methods based on PCR that are capable of detecting single target molecules in a sample input volume of, e.g., 5 µ1, and of quantifying organismal, e.g., chlamydial, DNA with high accuracy. Desirably, these methods employ a single tube format coupled with real-time fluorescent detection of amplicons. This approach facilitates the application of quantitative PCR (qPCR) to microbiological diagnosis in clinical settings. The invention also features primers and probes for the detection of Chlamidia. The use of specific hybridization probes with qPCR amplification provides the ability for identification of individual species or strains of microorganisms. La présente invention concerne des procédés basés sur la PCR (réaction en chaîne polymérase) qui sont capables de détecter des molécules cibles isolées dans un volume échantillon d'entrée de, par ex. 5 ñl, et de quantifier de l'ADN d'organismes, par ex. de Chlamydiae avec une précision élevée. De préférence, ces procédés emploient un format de tube simple couplé à la détection de fluorescence en temps réel d'amplicons. Cette approche facilite l'application de la PCR quantitative (qPCR) au diagnostic microbiologique dans des milieux cliniques. L'invention a également pour objet des amorces et des échantillons permettant la détection de Chlamydiae. L'utilisation d'échantillons d'hybridation spécifique avec amplification par qPCR donne la possibilité d'identifier des espèces ou souches individuelles de micro-organismes.