PLURIPOTENT STEM CELLS DERIVED WITHOUT THE USE OF EMBRYOS OR FETAL TISSUE

• Main Author: LEVANDUSKI, MIKE
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 27.11.2003
• Edition: 7
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

This invention provides a method for deriving precursors to pluripotent non-embryonic stem (P-PNES) and pluripotent non-embryonic stem (PNES) cell lines. The present invention involves nuclear transfer of genetic material from a somatic cell into an enucleated, zona pellucida free human ooplastoid having a reduced amount of total cytoplasm. The present invention provides a new source for obtaining human and other animal pluripotent stem cells. L'invention concerne une méthode permettant de dériver des précurseurs de lignées de souche non embryonique multipotente (P-PNES) et de souche non embryonique multipotente (PNES). L'invention concerne le transfert nucléaire de matériau génétique issu d'une cellule somatique dans un ooplastoïde humain dépourvu de zone pellucide énucléée présentant une quantité réduite de cytoplasme. L'invention concerne une nouvelle source d'obtention de cellules souches multipotentes d'origine humaine et animale. Cette source, qui utilise comme produits de départ, un oocyte et une cellule somatique, ne requiert pas l'utilisation, la création et/ou la destruction d'embryons ou de tissu foetal et n'impliquent aucunement la création d'un être cloné. L'oocyte n'est jamais fertilisé et ne se transforme jamais en embryon. En revanche, des parties du cytoplasme de l'oocyte sont extraites et combinées avec le matériau nucléaire de chaque cellule mature de manière à empêcher la formation d'un embryon. Des exemples murins, bovins et humains de la procédure sont illustrés dans la présente invention. Par la suite, les cellules P-PNES nouvellement construites sont cultivées in vitro et donnent lieu aux cellules PNES et aux colonies cellulaires. L'invention décrit des méthodes de culture des cellules P-PNES qui permettent d'obtenir des cellules PNES purifiées capables de se différencier en cellules dérivées des feuillets embryonnaires du mésoderme, de l'endoderme et de l'ectoderme ; des méthodes d'entretien et de multiplication de cellules PNES en culture dans un état indifférencié ; ainsi que des méthodes et des résultats permettant d'analyser et de valider la multipotence de cellules PNES, notamment la morphologie cellulaire, des marqueurs antigéniques, le développement d'une tumeur multipotente chez une souris SCID, le caryotypage, l'immortalité en culture in vitro.