PLURIPOTENT STEM CELLS DERIVED WITHOUT THE USE OF EMBRYOS OR FETAL TISSUE

• Main Author: LEVANDUSKI, MIKE
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 26.06.2003
• Edition: 7
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

This invention provides a method for deriving precursors to pluripotent non-embryonic stem (P-PNES) and pluripotent non-embryonic stem (PNES) cell lines. The present invention involves nuclear transfer of genetic material from a somatic cell into an enucleated, zona pellucida free human ooplastoid having a reduced amount of total cytoplasm. The present invention provides a new source for obtaining human and other animal pluripotent stem cells. The source utilizes as starting materials an oocyte and a somatic cell as the starting materials but does not require the use, creation and/or destruction of embryos or fetal tissue and does not in any way involve creating a cloned being. The oocyte never becomes fertilized and never develops into an embryo. Rather, portions of the oocyte cytoplasm are extracted and combined with the nuclear material of individual mature somatic cells in a manner that precludes embryo formation. Murine, bovine, and human examples of the procedure are demonstrated. Subsequently, the newly constructed P-PNES cells are cultured in vitro and give rise to PNES cells and cell colonies. Methods are described for culturing the P-PNES cells to yield purified PNES cells which have the ability to differentiate into cells derived from mesoderm, endoderm, and ectoderm germ layers. Methods are described for maintaining and proliferating PNES cells in culture in an undifferentiated state. Methds and results are described for analysis and validation of pluripotency of PNES cells including cell morphology, cell surface makers, pluripotent tumor development in SCID mouse, karyotyping, immortality in in vitro culture. L'invention concerne une méthode permettant de dériver des précurseurs de lignées de souche non embryonique multipotente (P-PNES) et de souche non embryonique multipotente (PNES). L'invention concerne le transfert nucléaire de matériau génétique issu d'une cellule somatique dans un ooplastoïde humain dépourvu de zone pellucide énucléée présentant une quantité réduite de cytoplasme. L'invention concerne une nouvelle source d'obtention de cellules souches multipotentes d'origine humaine et animale. Cette source, qui utilise comme produits de départ, un oocyte et une cellule somatique, ne requiert pas l'utilisation, la création et/ou la destruction d'embryons ou de tissu foetal et n'impliquent aucunement la création d'un être cloné. L'oocyte n'est jamais fertilisé et ne se transforme jamais en embryon. En revanche, des parties du cytoplasme de l'oocyte sont extraites et combinées avec le matériau nucléaire de chaque cellule mature de manière à empêcher la formation d'un embryon. Des exemples murins, bovins et humains de la procédure sont illustrés dans la présente invention. Par la suite, les cellules P-PNES nouvellement construites sont cultivées in vitro et donnent lieu aux cellules PNES et aux colonies cellulaires. L'invention décrit des méthodes de culture des cellules P-PNES qui permettent d'obtenir des cellules PNES purifiées capables de se différencier en cellules dérivées des feuillets embryonnaires du mésoderme, de l'endoderme et de l'ectoderme ; des méthodes d'entretien et de multiplication de cellules PNES en culture dans un état indifférencié ; ainsi que des méthodes et des résultats permettant d'analyser et de valider la multipotence de cellules PNES, notamment la morphologie cellulaire, des marqueurs antigéniques, le développement d'une tumeur multipotente chez une souris SCID, le caryotypage, l'immortalité en culture in vitro.