A METHOD FOR IDENTIFYING CONSTITUTIVELY ACTIVE MUTANTS OF MITOGEN ACTIVATED PROTEIN KINASES (MAPK) AND USES THEREOF

• Main Authors: LEVITZKI, ALEXANDER, ENGELBERG, DAVID, BELL, MICHAL
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 04.03.2004
• Edition: 7
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The present invention relates to a method of screening for constitutively active mutants of a desired eukaryotic MAPK pathway member of a MAPK pathway member, comprising the steps of (a) providing a mutant yeast strain devoid of an upstream kinase; (b) providing a DNA library of different mutants of a mutagenized gene coding for the desired MAPK pathway member; (c) introducing said library into said yeast strain under conditions suitable for activation of the yeast MAPK pathway; (d) detecting an end-point indication for activation of the yeast pathway; and (e) optionally isolating said constitutively activated mutant from selected rescued clones. The invention further relates to isolated constitutively active mutants of the MAPK pathway member, and their various uses particularly, in a method of screening for substances which are inhibitors of a MAPK pathway, and in drug design. La présente invention porte sur un procédé de criblage de mutants actifs constitutifs d'un mécanisme d'action eucaryotique désiré des protéines kinase activées par le mitogène. Ce procédé consiste à (a) produire une souche de levure de mutant dépourvue de kinase en amont; (b) produire une bibliothèque d'ADN de différents mutants d'un gène mutagénisé codant pour le mécanisme d'action désiré des protéines kinase activées par le mitogène; (c) introduire cette bibliothèque dans la souche de la levure dans des conditions appropriées à l'activation du mécanisme d'action des protéines kinase activées par le mitogène de la levure; (d) détecter une indication cible de l'activation du mécanisme d'action de la levure; et (e) isoler éventuellement ce mutant actif constitutif des clones rescapés, sélectionnés. L'invention porte également sur des mutants actifs constitutifs isolés du mécanisme d'action des protéines kinase activées par le mitogène, et sur leurs différentes utilisations, notamment dans un procédé de criblage de substances qui sont des inhibiteurs d'un mécanisme d'action des protéines kinase activées par le mitogène, et dans la conception rationnelle des médicaments.