A GENERAL METHOD FOR OPTIMIZING THE EXPRESSION OF HETEROLOGOUS PROTEINS

• Main Author: BALINT, ROBERT, F
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 26.04.2001
• Edition: 7
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; HUMAN NECESSITIES; HYGIENE; MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; ORGANIC CHEMISTRY; PEPTIDES; PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

Methods are disclosed whereby variants of proteins which do not confer selectable phenotypes can nevertheless be selected for stable expression in heterologous hosts. Related methods are disclosed whereby cDNA expression libraries can be enriched for stable expression of autonomously folding domains in heterologous hosts. Related methods are further disclosed whereby peptides which stabilize unstable proteins may be selected from random peptide libraries. If a heterologous protein is expressed as a fusion with a selectable phenotype, the strength of the phenotype is proportional to the folding rate, and therefore the solubility of the protein of interest. Thus, the selectable phenotype can be used to select better expressors from libraries of mutagenized proteins of interest, or it can be used to select autonomously folding domains (AFD) from cDNA expression libraries, or it can be used to select peptides which stabilize unstable proteins. L'invention concerne des procédés comprenant des variantes de protéines ne n'offrant aucun phénotype pouvant être sélectionné, mais pouvant néanmoins être sélectionnées pour une expression stable dans des hôtes hétérologues. L'invention concerne également des procédés associés comprenant des bibliothèques d'expressions de l'ADN complémentaire, pouvant être enrichies pour une expression stable des domaines de repliement autonome des chaînes dans des hôtes hétérologues. L'invention concerne également des procédés associés comprenant des peptides stabilisant des protéines instables, lesquels peptides peuvent être sélectionnés de manière aléatoire parmi des bibliothèques de peptides. Si une protéine hétérologue s'exprime par une fusion avec un phénotype pouvant être sélectionné, la résistance du phénotype est proportionnelle au taux de repliement des chaînes, et de ce fait à la solubilité de la protéine présentant un intérêt. Ainsi, le phénotype pouvant être sélectionné peut être utilisé pour sélectionner de meilleurs agents d'expression à partir des bibliothèques de protéines présentant un intérêt issues de la mutagenèse; ou encore, ce phénotype peut être utilisé pour sélectionner des domaines de repliement autonome de chaînes à partir de bibliothèques d'expressions de l'ADN complémentaire, ou pour sélectionner des peptides qui stabilisent des protéines instables.