METHOD FOR DETERMINATION OF FUNCTIONAL STATE OF INDUCIBLE NO-SYNTHASE SYSTEM IN PATIENTS WITH CARDIOVASCULAR PATHOLOGY

• Main Authors: YEVSTRATOVA IRYNA NYKYFORIVNA, HAVRYLENKO TETIANA ILLIVNA, YAKUSHKO LIUDMYLA VASYLIVNA, LIPKAN NAIRA HEORHIIVNA, MKHITARIAN LAURA SOKRATIVNA
• Format: Patent
• Language: English; Russian; Ukrainian
• Published: 10.03.2011
• Subjects: INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIRCHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES; MEASURING; PHYSICS; TESTING

Method for determination of characteristic of state of inducible NO-synthase system in patients with cardio-vascular pathology includes sampling of 5 ml of blood that includes heparin. Blood is left at 20 °C during two hours, blood plasma is dissolved with nutrient medium 199 at ratio 1:1 with slow laying on solution of ficol-verographin and with centrifugation at 1500 rev/min during 30 minutes, one removes ring of cells and washes with removal of rests of ficol-verographine through centrifugation with solution of total nutrition medium to which one adds 80 mg/ml of gentamicyn and 10 % solution of calf embryonic serum with calculation of number of cells in solution in Goriaev chamber on objective 10 or 20. To obtain supernatant to sterile penicillin flasks one introduces 1 ml of cell mix, with incubation during 24 hours at temperature 37 °C, content of flasks is centrifuged at 1000 rev/min., one samples over-deposit liquid, to 0,1 of over-deposit liquid one adds 0,4 ml of physiological solution, with performing de-proteinization with addition of 0,2 ml of 2N l . The mix is centrifuged at 10000 g during 10 min, to 0,4 ml of supernatant one adds 2 ml of reagent (1 ml 59 mM d acetyl-monox m + 1 ml 32 M ant pyr ne + 55 mM ferr c sulfate in HSO), with boiling during 15 min. on water bath and after cooling one determines value of extinction on spectrophotometer at wavelength 465 nm. To standard sample one adds 0,1 ml of 1 mM solution of citrulline. Спосіб визначення характеристики стану індуцебельної NO-синтазної системи у хворих з серцево-судинною патологією включає взяття 5 мл крові, що вміщує гепарин. Кров залишають стояти при 20 °С протягом двох годин, плазму крові розчиняють живильним середовищем 199 у співвідношенні 1:1 і повільно нашаровують на розчин фікол-верографіну та центрифугують при 1500 об./хв. протягом 30 хвилин, знімають кільце клітин та промивають від залишків фікол-верографіну шляхом центрифугування розчином повного живильного середовища, в який додають 80 мг/мл гентаміцину та 10 % розчин телячої ембріональної сироватки, рахують кількість клітин у розчині в камері Горяєва на об'єктиві № 10 або 20. Для отримання супернатанту в стерильні пеніцилінові флакони вносять 1 мл клітинної суміші, інкубують 24 години при температурі 37 °С, вміст флаконів центрифугують при 1000 об./хв., відбирають надосадкову рідину, до 0,1 мл надосадкової рідини додають 0,4 мл фізіологічного розчину, проводять депротеїнізацію додаванням 0,2 мл 2N НСlО. Суміш центрифугують при протягом 10 хв., до 0,4 мл супернатанту додають 2 мл реагенту (1 мл diacetyl-monoxim + 1 мл 32 мM antipyrine + ferric sulfate в HSO), кип'ятять протягом 15 хв. на водяній бані і після охолодження визначають величину екстинції на спектрофотометрі при довжині хвилі 465 нм. В стандартну пробу додають 0,1 мл розчину цитруліну.[Способ определения характеристики состояния индуцебельной NO-синтазной системы у больных с сердечно-сосудистой патологией включает забор 5 мл крови, с содержанием гепарина. Кровь оставляют стоять при 20 °С на протяжении двух часов, плазму крови растворяют питательной средой 199 в соотношении 1:1 и медленно наслаивают на раствор фи