METHOD FOR IDENTIFICATION OF COMMON HEDGEHOG (ERINACEUS EUROPAEUS) DNA TISSUE IN DRY FODDER AND SEMI-FINISHED MEAT

• Main Authors: Shevchenko Aleksandr Alekseevich, Koshchaev Andrej Georgievich, Lysenko Yurij Andreevich, Zabashta Sergej Nikolaevich, Krivonos Roman Anatolevich, Kuzminova Elena Vasilevna, Inyukina Tatyana Andreevna, Chernykh Vladimir Olegovich, Bannov Vasilij Aleksandrovich, Shevkoplyas Vladimir Nikolaevich, Shchukina Irina Vladimirovna, Kotelnikova Aleksandra Andreevna, Likhoman Aleksandr Vladimirovich, Lysenko Aleksandr Anatolevich, Chernykh Oleg Yurevich, Malyshev Denis Vladislavovich, Khakhov Latif Aslanbievich
• Format: Patent
• Language: English; Russian
• Published: 14.07.2020
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; ENZYMOLOGY; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: invention is a method for identification of common hedgehog DNA (Erinaceus europaeus) in dry fodders and semi-finished meat products, involving DNA recovery from animal tissue by sorption method, polymerase chain reaction with fluorescent detection is carried out with 45 cycles of real-time amplification using oligonucleotide primers, probes, fluorescent dyes specific for the DNA genome region: for a specific signal for an animal - JOE/Yellow and Cy5/Red - for an internal control sample in the form of a suspension of bacteriophage T4 with concentration of 5×10phage particles per 1 mcl, a positive control sample in the form of a mixture containing fragments of animal genomes and bacteriophage T4 with a nucleotide sequence: T4F: 5'-TACATATAAATCACGCAAAGC-3' - forward primer; T4R: 5'-TAGTATGGCTAATCTTATTGG-3' - reverse primer; T4P: HEX-5'-ACATTGGCACTGACCGAGTTC-3'-BHQ1 - probe, taken in ratio of 1:1, and measurement of accumulation of fluorescent signals through channels of corresponding fluorescent dyes, interpretation of results based on the presence or absence of the intersection of the fluorescence curve with the threshold line, if the fluorescence signal accumulation curves are up to 35 cycles, the reaction result is considered to be positive, and if the curves do not cross the threshold line or cross it after 35 cycles, the result of the reaction is negative, according to the invention, DNA is recovered from common hedgehog tissue (Erinaceus europaeus) and phage antigens of bacteriophage T4 are used for the internal control sample, and for the positive control sample - fragments of genomes of native bacteriophage T4 and hedgehogs (Erinaceus europaeus) with the following nucleotide sequence: Hed-F: 5'-AGTCTATTGATTCGAATAGAGC-3' - forward primer; Hed-R: 5'-CATGAGAGGTACTAACCAGT-3' - reverse primer; Hed-P: FAM-5'-CAGGAGCTTTATTAGGTGATGATCAG-3-BHQ1 - probe.EFFECT: invention increases identification accuracy of species identity, simplifies sample preparation process.1 cl, 5 tbl Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ идентификации ДНК ткани ежа обыкновенного (Erinaceus europaeus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах, включающий выделение ДНК из ткани животного сорбционным методом, постановку полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией с проведением 45 циклов амплификации в реальном времени с использованием специфичных для участка генома ДНК животного олигонуклеотидных праймеров, зондов, флуоресцентных красителей: для специфического сигнала для животного - JOE/Yellow и Cy5/Red - для внутреннего контрольного образца в виде суспензии бактериофага Т4 с концентрацией 5×10фаговых частиц на 1 мкл, положительного контрольного образца в виде смеси, содержащей фрагменты геномов животного и бактериофага Т4 с нуклеотидной последовательностью:- прямой праймер- обратный праймер- зонд, взятых в соотношении 1:1, и измерение накопления флуоресцентных сигналов по каналам соответствующих флуоресцентных красителей, проведение интерпретации результатов на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считается положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции - отрицательный, согласно изобретению выделяют ДНК из ткани ежа обыкновенного (Erinaceus europaeus) и для внутреннего контрольного образца используют фаголизат бактериофага Т4, а для положительного контрольного образца - фрагменты геномов нативного бактериофага Т4 и ткани ежа обыкновенного (Erinaceus europaeus) со следующей нуклеотидной последовательностью:- прямой праймер- обратный праймер- зонд. Изобретение повышает точность идентификации видовой принадлежности, упрощение процесса подготовки образцов. 5 табл.