TEST SYSTEM FOR IDENTIFICATION OF COMMON HEDGEHOG (ERINACEUS EUROPAEUS) TISSUE DNA IN DRY FODDER AND SEMI-FINISHED MEAT PRODUCTS

• Main Authors: Koshchaev Andrej Georgievich, Lysenko Aleksandr Anatolievich, Lysenko Yurij Andreevich, Zabashta Sergej Nikolaevich, Krivonos Roman Anatolevich, Kuzminova Elena Vasilevna, Chernykh Vladimir Olegovich, Bannov Vasilij Aleksandrovich, Kotelnikova Aleksandra Andreevna, Sharavev Pavel Viktorovich, Krivonogova Anna Sergeevna, Usenko Valentina Vladimirovna, Chernykh Oleg Yurevich, Malyshev Denis Vladislavovich
• Format: Patent
• Language: English; Russian
• Published: 30.06.2020
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; ENZYMOLOGY; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: invention represents a test system for identification of common hedgehog (Erinaceus europaeus) tissue DNA in dry fodder and semi-finished meat products, including a polymerase chain reaction buffer, a mixture for its carrying out, consisting of deoxynucleoside triphosphates, oligonucleotide primers and fluorescent probes of region-specific animal genome and for internal control sample; mixture of enzymes from DNA polymerase with antibodies inhibiting enzyme activity, TAQ POLYMERASE, an internal control sample in the form of a bacteriophage T4 suspension with concentration of 5×10phagic particles per 1 mcl, a negative control sample which is a mixture of recombinant plasmid DNA, containing a fragment of the animal's genome and a fragment of the bacteriophage T4 genome with a nucleotide sequence: T4F: 5`-TACATATAAATCACGCAAAGC-3` - forward primer; T4R: 5`- TAGTATGGCTAATCTTATTGG-3` - reverse primer; T4P: HEX-5`-ACATTGGCACTGACCGAGTTC-3`-BHQ1 - probe, taken in volume ratio of 1:1, according to invention for internal control sample phagolysate of bacteriophage T4 is used, and for positive control sample fragments of genomes of native bacteriophage T4 and hedgehog (Erinaceus europaeus) with following nucleotide sequence are used: Hed-F: 5`-AGTCTATTGATTCGAATAGAGC-3` - forward primer; Hed-R: 5`-CATGAGAGGTACTAACCAGT-3` - reverse primer; Hed-P: FAM-5`-CAGGAGCTTTATTAGGTGATGATCAG-3-BHQ1 - probe.EFFECT: invention allows to expand functional capabilities, increase accuracy of species identity identification, simplification of sample preparation process.1 cl, 5 tbl Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой тест-систему для идентификации ДНК ткани ежа обыкновенного (Erinaceus europaeus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах, включающую буфер для проведения полимеразной цепной реакции, смесь для ее проведения, состоящую из дезоксинуклеозидтрифосфатов, олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентных зондов специфичных для участка генома животного и для внутреннего контрольного образца; смесь ферментов из ДНК полимеразы с антителами, ингибирующих активность фермента, TAQ POLYMERASE, внутренний контрольный образец в виде суспензии бактериофага Т4 с концентрацией 5×10фаговых частиц на 1 мкл, отрицательный контрольный образец, представляющий собой смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащую фрагмент генома животного и фрагмент генома бактериофага Т4 с нуклеотидной последовательностью: T4F: 5`-TACATATAAATCACGCAAAGC-3` - прямой праймер; T4R: 5`- TAGTATGGCTAATCTTATTGG-3` - обратный праймер; Т4Р: НЕХ-5`-ACATTGGCACTGACCGAGTTC-3`-BHQ1 - зонд, взятых в объемном соотношении 1:1, согласно изобретению для внутреннего контрольного образца используют фаголизат бактериофага Т4, а для положительного контрольного образца используют фрагменты геномов нативного бактериофага Т4 и ткани ежа обыкновенного (Erinaceus europaeus) со следующей нуклеотидной последовательностью: Hed-F: 5`-AGTCTATTGATTCGAATAGAGC-3` - прямой праймер; Hed-R: 5`-CATGAGAGGTACTAACCAGT-3` - обратный праймер; Hed-P: FAM-5`-CAGGAGCTTTATTAGGTGATGATCAG-3-BHQ1 - зонд. Изобретение позволяет расширить функциональные возможности, повысить точность идентификации видовой принадлежности, упрощение процесса подготовки проб. 5 табл.