METHOD OF ANTIGEN RETRIEVAL DURING IMMUNOCYTOCHEMICAL REACTIONS

• Main Authors: Alekseeva Olga Sergeevna, Kirik Olga Viktorovna, Korzhevskij Dmitrij Eduardovich
• Format: Patent
• Language: English; Russian
• Published: 17.04.2020
• Subjects: INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIRCHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES; MEASURING; PHYSICS; TESTING

FIELD: medicine.SUBSTANCE: invention refers to medicine, namely to diagnostic histologic examinations. Disclosed is a method of antigens retrieval in immunocytochemical reactions involving fixing preparation in 10 % formalin for 24 hours at room temperature, procedure for dehydration, paraffin preparation, preparation of histological sections with thickness of 5 to 10 mcm, application thereof on adhesive slides, dewaxing in xylene, conducting on alcohols of lower concentration, washing for 5 minutes in distilled water, characterized by that after washing sections for 22 minutes subjected to thermal retrieval in 10 % aqueous solution of sodium thiosulphate, preheated to 45-60 °C, cooled glasses are washed with distilled water, left in 0.01 M phosphate-salt buffer with pH 7.4 for 5 minutes at room temperature, then blocking solution is applied for 10 minutes at room temperature, excess solution is drained and, without washing preparations, first antibodies are applied on glass, after which the preparations are placed in a moist chamber and incubated in a thermostat at temperature of 27 °C for 20 hours, then washed in three changes of distilled water for 5 minutes in each, after which secondary antibodies are applied and incubated in a moist chamber in a thermostat at temperature of 27 °C for 30 minutes, are washed in three changes of distilled water for 5 minutes in each, then chromogen solution is applied and during 1-3 minutes formation of colored product of histochemical reaction is monitored under a microscope, chromogen is washed off and preparations are washed in 2-3 portions of distilled water for 5 minutes in each, if necessary, the preparations are colored by histological dyes, dehydrated in alcohols of the ascending fortress, clarified in xylene and enclosed in any non-water-soluble confinement medium.EFFECT: high efficiency and industrial safety of the method of antigens retrieval.1 cl, 2 dwg, 1 ex Изобретение относится к медицине, а именно к диагностическим гистологическим исследованиям. Предложен способ демаскирования антигенов при проведении иммуноцитохимических реакций, включающий фиксацию препарата в 10% формалине в течение 24 ч при комнатной температуре, процедуру обезвоживания, заключение в парафин, приготовление гистологических срезов толщиной от 5 до 10 мкм, нанесение их на адгезивные предметные стекла, депарафинизацию в ксилоле, проводку по спиртам понижающей концентрации, промывку в течение 5 мин в дистиллированной воде, отличающийся тем, что после промывки срезов их в течение 22 мин подвергают процедуре теплового демаскирования в 10% водном растворе тиосульфата натрия, предварительно прогретом до 45-60°С, остывшие стекла промывают дистиллированной водой, оставляют в 0,01 М фосфатно-солевом буфере с рН 7,4 на 5 мин при комнатной температуре, затем на срезы наносят блокировочный раствор на 10 мин при комнатной температуре, сливают излишек раствора и, не промывая препараты, наносят на стекла первичные антитела, после чего препараты размещают во влажной камере и инкубируют в термостате при температуре 27°С в течение 20 ч, затем промывают в трех сменах дистиллированной воды по 5 мин в каждой, после этого наносят вторичные антитела и инкубируют во влажной камере в термостате при температуре 27°С в течение 30 мин, промывают в трех сменах дистиллированной воды по 5 мин в каждой, затем наносят раствор хромогена и в течение 1-3 мин отслеживают образование окрашенного продукта гистохимической реакции под микроскопом, смывают хромоген и промывают препараты в 2-3 порциях дистиллированной воды по 5 мин в каждой, при необходимости препараты подкрашивают гистологическими красителями, обезвоживают в спиртах восходящей крепости, просветляют в ксилоле, заключают в любую не водорастворимую заключающую среду. Технический результат - повышение эффективности и промышленной безопасности способа демаскирования антигенов. 2 ил., 1 пр.