METHOD FOR PRODUCING PARVOVIRUS CHARACTERIZED BY HIGH INFECTIVITY TITRE AND HIGH PURITY

• Main Authors: SAWAMURA, Yoshiyuki, YANAGIDA, Koichiro
• Format: Patent
• Language: English; Russian
• Published: 02.10.2019
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: invention relates to biotechnology and specifically to a method of producing parvovirus derived from an unconjugated cell culture supernatant. Method comprises (a) a pre-calculation step every 24 hours of a time-dependent change in cell density in a culture substrate, when host cells are infected with parvovirus for each cell density (A) when infected with a virus; (b) a step for determining, based on the time-dependent change in cell density, calculated at step (a), (b1), the time (T) from infection to time of peak time-dependent change in cell density, (b2) cell density (B) at Tand A1, which is A, which satisfies following equation (1) B/A1>1.2, (b3) maximum (A) cell density A1 when infected with virus and (b4) A2, which satisfies following equation (2) A≥A≥A/10; (c) a stage of inoculation of seed parvovirus into a culture substrate containing host cells having cell density A2, wherein the infecting virus defined in (b4) of step (b) and the serum medium give a multiplicity of infection (MOI) of 0.001 to 0.1; (d) a cultivation stage of a cultured product containing host cells and parvovirus obtained at step (c) for a period of time Tor more to less than (T+48) hours, where Tis defined in (b1) of step (b); (e) a step for replacing the culture supernatant obtained in step (d) with a serum-free medium and culturing for 12 hours or more; and (f) a step for collecting a parvovirus-containing culture supernatant produced by culturing at step (e); where at step (b), when A satisfying equation (1) is absent, steps (a) and (b) are repeated by using another density of cells A when infected with virus.EFFECT: invention enables to obtain parvovirus with high infectivity titre for use in evaluating viral safety of pharmaceutical or biological products or when producing vaccines.9 cl, 10 tbl, 4 ex Изобретение относится к биотехнологии, а именно, способу получения парвовируса, происходящего из неконцентрированного супернатанта клеточной культуры. Способ включает (a) стадию предварительного расчета каждые 24 часа зависимого от времени изменения плотности клеток в культуральном субстрате, когда клетки-хозяева инфицируются парвовирусом, для каждой плотности клеток (A) при инфицировании вирусом; (b) стадию определения на основе зависимого от времени изменения клеточной плотности, рассчитанной предварительно на стадии (a), (b1) время (T) от инфицирования до времени пика зависимого от времени изменения плотности клеток, (b2) плотность клеток (B) при Tи A1, которая представляет собой A, которая удовлетворяет следующему уравнению (1) B/A1>1,2, (b3) максимальную (A) плотность клеток A1 при инфицировании вирусом и (b4) A2, которая удовлетворяет следующему уравнению (2) A≥A≥A/10; (c) стадию инокуляции посевного парвовируса в культуральный субстрат, содержащий клетки-хозяева, имеющие плотность клеток A2, где инфицирующий вирус, определенный в (b4) стадии (b), и сывороточная среда дают множественность заражения (MOI) от 0,001 до 0,1; (d) стадию культивирования культивируемого продукта, содержащего клетки-хозяева и парвовирус, полученные на стадии (c), в течение периода времени Tили более до менее (T+48) часов, где Tопределено в (b1) стадии (b); (e) стадию замены культурального супернатанта, полученного на стадии (d), бессывороточной средой и культивирования в течение 12 часов или более; и (f) стадию сбора содержащего парвовирус культурального супернатанта, полученного путем культивирования на стадии (e); где на стадии (b), когда A, удовлетворяющая уравнению (1), отсутствует, стадии (a) и (b) осуществляют повторно путем использования другой плотности клеток A при инфицировании вирусом. Изобретение позволяет получить парвовирус с высоким титром инфекционности для применения при оценке вирусной безопасности фармацевтических или биологических продуктов или при получении вакцин. 8 з.п. ф-лы, 10 табл., 4 пр.