METHOD OF PRODUCING RECOMBINANT ANTI-TUMOR TOXIN BASED ON PROTEIN BARNASE-BARSTAR AND TARGETED POLYPEPTIDE DARPIN WITH EFFECT OF INSTANT CANCELLATION OF CYTOTOXIC ACTION

• Main Authors: Shulga Aleksej Anatolevich, Lebedenko Ekaterina Nikolaevna, Stremovskij Oleg Anatolevich, Proshkina Galina Mikhajlovna, Deev Sergej Mikhajlovich
• Format: Patent
• Language: English; Russian
• Published: 08.02.2017
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES USING MICROORGANISMS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

FIELD: biochemistry.SUBSTANCE: invention relates to biochemistry, biotechnology and medicine, namely to method of producing recombinant anti-tumor toxin-chimeric bifunctional protein, consisting of targeted polypeptide Darpin 9-29, specific to histochemical marker HER2/neu, and highly active bacterial ribonuclease barnase, connected with flexible peptide linker. For implementation of this method recombinant strain is producedBL21(DE3)/pETDa by embedding into strain ofBL21(DE3) plasmid pETDa. Said plasmid is produced by cloning of recombinant DNA fragment, coding said chimeric protein, in plasmid vector pET22 at restriction sites NdeI/HindIII.EFFECT: present invention enables to obtain targeted protein characterized by low risk of side effects due to instant cancellation of cytotoxicity for targeting on HER2/neu therapy of tumors overexpressing HER2 receptor.3 cl, 8 dwg, 3 tbl, 11 ex Изобретение относится к области биохимии, биотехнологии и медицины, в частности к способу получения рекомбинантного противоопухолевого токсина - химерного бифункционального белка, состоящего из адресного полипептида Darpin 9-29, специфичного к гистохимическому маркеру HER2/neu, и высокоактивной бактериальной рибонуклеазы барназы, соединенных гибким пептидным линкером. Для осуществления указанного способа получают рекомбинантный штаммBL21(DE3)/pETDa путём встраивания в штаммBL21(DE3) плазмиды pETDa. Указанная плазмида получена путём клонирования рекомбинантного фрагмента ДНК, кодирующего указанный выше химерный белок, в плазмидный вектор pET22 по сайтам рестрикции NdeI/HindIII. Настоящее изобретение позволяет получить адресный белок, характеризующийся сниженным риском побочного воздействия за счет возможности моментальной отмены цитотоксичности, для нацеливающей на HER2/neu терапии опухолей, гиперэкспрессирующих рецептор HER2. 3 н.п. ф-лы, 8 ил., 3 табл., 11 пр.