METHOD TO DETECT AVAILABILITY OF BACTERIA Escherichia coli O157:H7 IN BIOLOGICAL AND FOOD SAMPLES BASED ON IMMUNODETECTION COUPLED WITH POLYMERASE CHAIN REACTION

• Main Authors: KOLESNIKOV ALEKSANDR VLADIMIROVICH, SHEMJAKIN IGOR' GEORGIEVICH, DJATLOV IVAN ALEKSEEVICH, KRASAVTSEVA OL'GA NIKOLAEVNA, LUNEVA NINA MIKHAJLOVNA, RJABKO ALENA KONSTANTINOVNA, SAVCHENKO GALINA ALEKSANDROVNA, ZHARNIKOVA IRINA VIKTOROVNA, KOZYR' ARINA VLADIMIROVNA, KHLYNTSEVA ANNA EVGEN'EVNA
• Format: Patent
• Language: English; Russian
• Published: 20.11.2015
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; ENZYMOLOGY; INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIRCHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES; MEASURING; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PHYSICS; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; PROCESSES USING MICROORGANISMS; SPIRITS; TESTING; VINEGAR; WINE

FIELD: biotechnologies.SUBSTANCE: method is proposed to detect availability of bacteria Escherichia coli of strain O157:H7 in biological fluids, environment and food, including disintegration of bacteria with fermentative treatment and lysis by a non-ionic detergent, adsorption on paramagnetic particles with the help of a specific monoclonal antibody, detection of antigen of bacteria E.coli O157:H7 with the help of a specific biotin-modified antibody, coupling of the produced complex with non-covalent conjugate of DNA-matrix with neutravidine, dissociation of solid-phase complex "antibody-antigen E.coli O157:H7 - biotin-modified antibody-conjugate" with addition of solution of glycine - HCl pH 2.6, PCR-amplification of DNA-matrix and detection of availability of bacteria E.coli O157:H7 by speed of fluorescent signal increase.EFFECT: method has high specificity and sensitivity of detection and may be used in early diagnostics of haemorrhagic colitis and sanitary-hygienic control over availability of its inducer.5 dwg, 8 ex Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ определения наличия в биологических жидкостях, окружающей среде и продуктах питания бактерийштамма O157:Н7, включающий дезинтеграцию бактерий ферментативной обработкой и лизис неионным детергентом, адсорбцию на парамагнитных частицах при помощи специфического моноклонального антитела, детекцию антигена бактерийO157:Н7 при помощи специфического биотинилированного моноклонального антитела, связывание полученного комплекса с нековалентным коньюгатом ДНК-матрицы с нейтравидином, диссоциацию твердофазного комплекса "антитело-антигенO157:Н7 - биотинилированное антитело-коньюгат" добавлением раствора глицин - HCl рН 2.6, ПЦР-амплификацию ДНК-матрицы и выявление наличия бактерийO157:Н7 по скорости нарастания флуоресцентного сигнала. Данный способ отличается высокой специфичностью и чувствительностью детекции и может быть использован в ранней диагностике геморрагического колита и санитарно-гигиеническом контроле над наличием его возбудителя. 5 ил., 8 пр.