STRAIN Escherichia coli BL21(DE3)Gold/pETmin-CypA PRODUCING HUMAN RECOMBINANT CYCLOPHILIN A

• Main Authors: KHROMYKH LJUDMILA MENDELEVNA, LAZAREV VASILIJ NIKOLAEVICH, KALININA ANASTASIJA ANDREEVNA, SILAEVA JULIJA JUR'EVNA, VAGIDA MURAD SUSLANOVICH, KAZANSKIJ DMITRIJ BORISOVICH, MANUVERA VALENTIN ALEKSANDROVICH
• Format: Patent
• Language: English; Russian
• Published: 20.07.2015
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES USING MICROORGANISMS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

FIELD: medicine.SUBSTANCE: invention refers to biotechnology and concerns the strain Escherichia coli BL21(DE3)Gold/pETmin-CypA producing human recombinant cyclophilin A. The characterised strain is produced by cell transformation of the strain BL21(DE3)Gold by pETmin-CypA plasmid. The plasmid has a size of 5865 base pairs and contains XhoI-NdeI fragment of pET-22b(+) vector carrying ampR ampicillin resistance gene, a promoter and RNA-polymerase T7 phage terminator and a polylinker. A fragment produced by PCR with using the oligonucleotide primers 5'-TTATACATATGGTCAACCCGACCGTGTTCTTC and 5'-TTTCTCGAGTTATTCGAGTTGTCCACAGTCAGC of pCyPAwt/pGEX-2TK plasmid with the closed fragment of hrCpA (human recombinant cyclophilin A) gene having a size of 498 base pairs is cloned at XhoI-NdeI sites.EFFECT: presented strain is high-producing; it requires no complicated clean-up system and can be used in cancer treatment.2 dwg Изобретение относится к области биотехнологии и касается штамма Escherichia coli BL21(DE3)Gold/pETmin-CypA - продуцента рекомбинантного циклофилина А человека. Охарактеризованный штамм получен путем трансформации клеток штамма BL21(DE3)Gold плазмидой pETmin-CypA. Плазмида имеет размер 5865 пар нуклеотидов и содержит фрагмент XhoI-NdeI вектора рЕТ-22b(+), несущего ген устойчивости к ампициллину ampR, промотор и терминатор РНК-полимеразы фага Т7 и полилинкер. По сайтам XhoI-NdeI клонирован фрагмент, полученный с помощью ПЦР с использованием олигонуклеотидных праймеров 5′-TTATACATATGGTCAACCCGACCGTGTTCTTC и 5′-TTTCTCGAGTTATTCGAGTTGTCCACAGTCAGC плазмиды pCyPAwt/pGEX-2TK с клонированным фрагментом гена рчЦфА размером 498 п.н. Предложенный штамм высокопродуктивен, не требует сложной системы очистки и может быть использован в противоопухолевой терапии. 2 ил.