METHOD OF EXTRACTION OF EXOSOMES FROM BLOOD

• Main Authors: LAKTIONOV PAVEL PETROVICH, VLASOV VALENTIN VIKTOROVICH, TUTANOV OLEG SERGEEVICH, GRIGOR'EVA ALINA EVGEN'EVNA, RJABCHIKOVA ELENA IVANOVNA, TAMKOVICH SVETLANA NIKOLAEVNA
• Format: Patent
• Language: English; Russian
• Published: 20.07.2015
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

FIELD: biotechnologies.SUBSTANCE: blood is separated into plasma and cellular fraction. Then the blood cellular fraction is subjected to successive two-phase treatment first by the buffer PBS solution containing 5 mM of EDTA with subsequent centrifugation and collection of supernatant. Cells are treated by equal volume of 0.15-0.35% trypsin solution in PBS with subsequent centrifugation and collection of supernatant. Plasma and extracted supernatants from cellular fraction are merged, cellular debris is removed by centrifugation at 15000-17000 g within 10-20 minutes. Foreign particles of non-exosome origin by filtration through filters with the diameter pores 0.1 mcm, and the total pool of exosomes is settled by ultracentrifugation at 100000-160000 g during 60-120 minutes.EFFECT: invention allows to increase yield and purity of target product, reduce duration and labour input of the method.3 cl, 2 dwg, 1 tbl, 3 ex Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу получения экзосом из крови. Кровь разделяют на плазму и клеточную фракцию. Далее клеточную фракцию крови подвергают последовательной двухстадийной обработке сначала буферным раствором PBS, содержащим 5 мМ ЭДТА, с последующим центрифугированием и сбором супернатанта. Обрабатывают клетки равным объемом 0,15-0,35% раствора трипсина в PBS с последующим центрифугированием и сбором супернатанта. Плазму и полученные супернатанты из клеточной фракции объединяют, удаляют клеточный дебрис центрифугированием при 15000-17000 g в течение 10-20 минут. Удаляют примесь частиц неэкзосомального происхождения путем фильтрации через фильтры с диаметром пор 0,1 мкм, а суммарный пул экзосом осаждают ультрацентрифугированием при 100000-160000 g в течение 60-120 минут. Предложенное изобретение позволяет повысить выход и чистоту целевого продукта, а также сократить длительность и снизить трудоемкость способа. 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл., 3 пр.