FLOW IMMUNOASSAY SYSTEM AND METHOD FOR DETERMINING MYCOTOXINS

• Main Authors: CHIVULESCU IOAN ALEXANDRU, OCNARU EMILIA, BADEA DONI MIHAELA
• Format: Patent
• Language: English; Romanian
• Published: 29.06.2012
• Subjects: INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIRCHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES; MEASURING; PHYSICS; TESTING

The invention relates to a flow immunoassay system and method for determining mycotoxins. The claimed immunoassay system comprises a multi-channel peristaltic pump (P), a carrier stream (a) wherein there is injected a pre-incubated mixture by means of a valve (I), said pre-incubated mixture comprising the sample to be analyzed, an antigen marked with peroxidase and a specific antibody, a minicolumn (PG) charged with an insoluble support on which there is immobilized the protein G, a flow of oxygenated water solution (b), a flow of luminol solution (c), a flow analysis cell (FC) and a photomultiplier tube (FMT) operated by a computer (PC). The claimed method is based on the offline incubation of the mycotoxin-containing sample with precise amounts of specific antibody and marked antigen until the equilibrium is reached, in the mixture there taking place a competition of antigen for the antibody, the mixture is injected into the flow immunoassay system so that the mixture passes through the micro-column with protein G wherein the entire amount of antibody is retained in the form of a complex, and the free-form of the marked antigen is eluated and quantified by evaluating the enzymatic activity of the peroxydase on the basis of chemiluminescence reaction, the signal being proportioned with the antigen concentration in the sample. Prezenta invenţie se referă la un sistem şi o metodă de imunoanaliză în flux, pentru determinare de micotoxine. Conform invenţiei, sistemul de imunoanaliză este format dintr-o pompă peristaltică multicanal (P), un flux purtător (a) în care se injectează, prin intermediul unei valve (I), un amestec preincubat, format din proba de analizat, un antigen marcat cu peroxidază şi un anticorp specific, o minicoloană (PG) încărcată cu un suport insolubil, pe care este imobilizată proteina G, un flux de soluţie de apă oxigenată (b), un flux de soluţie de luminol (c), o celulă de analiză în flux (FC) şi un tub fotomultiplicator (FMT) operat de un computer (PC). Metoda de analiză conform invenţiei se bazează pe incubarea off-line a probei conţinând micotoxina, cu cantităţi precise de anticorp specific şi de antigen marcat, până la atingerea echilibrului, în amestec având loc o competiţie a antigenilor pentru anticorp; amestecul se injectează în sistemul de imunoanaliză în flux, astfel încât trece prin microcoloana cu proteina G, unde este reţinută întreaga cantitate de anticorp sub formă de complex, iar forma liberă a antigenului marcat este eluată şi cuantificată prin evaluarea activităţii enzimatice a peroxidazei pe baza reacţiei de chemiluminescenţă, mărimea semnalului fiind proporţională cu concentraţia antigenului din probă.