FUNCTIONALIZATION PROCESS BY MEANS OF MERCAPTOHEXANOL FOR THE COVALENT ANCHORING OF DNA OVER GOLD WITH POTENTIAL IMPLEMENTATION FOR THE DEVELOPMENT OF BIOSENSORS

• Main Authors: MARCO ANTONIO RAMÍREZ SALINAS, ÁNGEL MILIAR GARCÍA, LUIS ALFONSO VILLA VARGAS, MARÍA DE LOS ÁNGELES MARTÍNEZ GODÍNEZ, NADIA MABEL PÉREZ VIELMA
• Format: Patent
• Language: English; Spanish
• Published: 17.02.2016
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The present invention establishes a method for the covalent anchoring of deoxyribonucleic acid extracted from eukaryotic cells, specifically products of polymerase chain reaction, over gold substrates. This method has the advantage of being quick, easy, marking free, affordable and may be used for the potential development of biosensors of deoxyribonucleic acid. The covalent anchoring method for deoxyribonucleic acid provided in the invention is formed by several steps: the first step refers to the formation of a self-assembly monolayer of 6-mercapto-1-hexanol over the gold substrate, the second step being the activation of said monolayer with the compounds N-3-Dimethylaminopropyl-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride and N-hydroxysuccinimide, the third step including the location of the polymerase chain reaction products over the gold substrate, previously purified and denaturalized. The final step consists in the exposure of the gold substrate with the polymerase chain reaction product s to the UV light for 3 min; this last step allows the covalent link between the polymerase chain reaction products and the monolayer of 6-mercapto-1-hexanol to be reinforced. One of the main applications of the inventive anchoring method is the determination of mutations or polymorphisms performed by directly using the deoxyribonucleic acid of patients, which has a greater number of applications above all in the diagnosis of a variety of diseases. La presente invención establece un método para el anclaje covalente de ácido desoxirribonucleico extraído de células eucariontes, específicamente productos de reacción en cadena de la polimerasa, sobre sustratos de oro. Este método tiene la ventaja de ser rápido, sencillo, libre de marcaje, económico y puede ser empleado para el desarrollo potencial de biosensores de ácido desoxirribonucleico. El método de anclaje covalente para ácido desoxirribonucleico que proponemos está compuesto por varias etapas; la primera es la formación de una monocapa de autoensamblaje de 6-mercapto-1-hexanol sobre el sustrato de oro, la segunda la activación de dicha monocapa con los compuestos clorhidrato de N-3-Dimetilaminopropil-N'-etilcarbodiimida y N-Hidroxisuccinimida, la tercera la colocación de los productos de reacción en cadena de la polimerasa sobre el sustrato de oro, previamente purificados y desnaturalizados. Mientras que la etapa final consiste en la exposición del sustrato de oro con los productos de reacción en cadena de la polimerasa a la luz ultravioleta por 3 min; este último paso permite reforzar el enlace covalente entre los productos de reacción en cadena de la polimerasa y la monocapa de 6-mercapto-1-hexanol. Una de las principales aplicaciones del método de anclaje propuesto es la determinación de cualquier mutación o polimorfismo usando directamente el ácido desoxirribonucleico de los pacientes, lo cual tiene un mayor número de aplicaciones sobre todo en el diagnóstico de una variedad de enfermedades.