COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODIFYING GENOMES

• Main Authors: GRAY BENJAMIN NEIL, BEGEMANN MATTHEW
• Format: Patent
• Language: English; Korean
• Published: 08.02.2024
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

게놈 DNA 서열을 변형시키기 위한 조성물 및 방법이 제공된다. 상기 방법은 게놈 DNA 서열에서 예정된 표적 부위에 이중-가닥 절단 (DSB)을 생성하여, 게놈에서 표적 부위(들)에서의 DNA 서열의 돌연변이, 삽입 및/또는 결실을 일으킨다. 조성물은 관심 세포에서 작동가능한 프로모터에 작동가능하게 연결된, Cms1 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 구축물을 포함한다. DNA 구축물을 이용하여 예정된 게놈 유전자위에서 게놈 DNA의 변형을 지시할 수 있다. 게놈 DNA 서열을 변형시키기 위해 이들 DNA 구축물을 이용하는 방법이 본원에 기재된다. 추가로, 유전자의 발현을 조절하기 위한 조성물 및 방법이 제공된다. 조성물은 전사 활성을 조절하는 도메인에 임의적으로 연결된, DSB를 생성하는 능력이 폐지된 돌연변이된 Cms1 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 작동가능하게 연결된, 관심 세포에서 작동가능한 프로모터를 포함하는 DNA 구축물을 포함한다. 상기 방법을 이용하여 예정된 게놈 유전자위에서 유전자의 발현을 상향- 또는 하향-조절할 수 있다. Compositions and methods for modifying genomic DNA sequences are provided. The methods produce double-stranded breaks (DSBs) at pre-determined target sites in a genomic DNA sequence, resulting in mutation, insertion, and/or deletion of DNA sequences at the target site(s) in a genome. Compositions comprise DNA constructs comprising nucleotide sequences that encode a Cms1 protein operably linked to a promoter that is operable in the cells of interest. The DNA constructs can be used to direct the modification of genomic DNA at pre-determined genomic loci. Methods to use these DNA constructs to modify genomic DNA sequences are described herein. Additionally, compositions and methods for modulating the expression of genes are provided. Compositions comprise DNA constructs comprising a promoter that is operable in the cells of interest operably linked to nucleotide sequences that encode a mutated Cms1 protein with an abolished ability to produce DSBs, optionally linked to a domain that regulates transcriptional activity. The methods can be used to up- or down-regulate the expression of genes at predetermined genomic loci.