CPF1 CSM1 COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODIFYING GENOMES USING CPF1 OR CSM1

• Main Authors: GRAY BENJAMIN NEIL, BEGEMANN MATTHEW
• Format: Patent
• Language: English; Korean
• Published: 05.12.2023
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

본 발명은 게놈 DNA 서열을 변형하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 게놈 DNA 서열 내의 소정 표적 부위에서 이중-가닥 파괴(DSB)를 야기하여 상기 게놈 내의 표적 부위에서 DNA 서열의 돌연변이, 삽입 및/또는 결실을 유발한다. 상기 조성물은 해당 세포 내에서 작동가능한 프로모터에 작동가능하게 연결된 Cpf1 또는 Csm1 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 구성체를 포함한다. DNA 구성체는 게놈 자리에서 게놈 DNA의 변형에 직접 사용될 수 있다. 본 발명은 게놈 DNA 서열을 변형하는데 이러한 DNA 구성체를 사용하는 방법에 관한 것이다. 추가적으로, 본 발명은 유전자의 발현을 조절하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 상기 조성물은 전사 활성을 조절하는 도메인에 작동하게 연결된, DSB를 생성하는 폐지된 능력을 갖는 돌연변이된 Cpf1 또는 Csm1 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 작동가능하게 연결된 해당 세포 내에서 작동가능한 프로모터를 포함하는 DNA 구성체를 포함한다. 상기 방법은 소정 게놈 자리에서 유전자의 발현을 상향조절하거나 하향조절하는데 사용될 수 있다. Compositions and methods for modifying genomic DNA sequences are provided. The methods produce double-stranded breaks (DSBs) at pre-determined target sites in a genomic DNA sequence, resulting in mutation, insertion, and/or deletion of DNA sequences at the target site(s) in a genome. Compositions comprise DNA constructs comprising nucleotide sequences that encode a Cpf1 or Csm1 protein operably linked to a promoter that is operable in the cells of interest. The DNA constructs can be used to direct the modification of genomic DNA at pre-determined genomic loci. Methods to use these DNA constructs to modify genomic DNA sequences are described herein. Additionally, compositions and methods for modulating the expression of genes are provided. Compositions comprise DNA constructs comprising a promoter that is operable in the cells of interest operably linked to nucleotide sequences that encode a mutated Cpf1 or Csm1 protein with an abolished ability to produce DSBs, optionally linked to a domain that regulates transcriptional activity. The methods can be used to up- or down-regulate the expression of genes at predetermined genomic loci.