필수 유전자 녹-인에 의한 선택

• Main Authors: MONETTI CLAUDIO, MCAULIFFE CONOR BRIAN, ZURIS JOHN ANTHONY, TOMISHIMA MARK JAMES, SOH CHEW LI, MARGULIES CARRIE MARIE, TONGE PETER
• Format: Patent
• Language: Korean
• Published: 03.03.2023
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

리포터 유전자가 없는 녹-인(knock-in) 세포 클론의 효율적인 생산을 위한 전략, 시스템, 조성물, 및 방법. 필수 유전자는 필수 유전자의 외인성 코딩 서열 또는 부분 코딩 서열의 프레임 내에 및 이의 다운스트림(3')에 관심 유전자 산물에 대한 외인성 코딩 서열(또는 "카고 서열")을 포함하는 녹-인 카세트를 사용하여 표적화된다. 요망되지 않는 표적화 사건은 필수 유전자의 비-기능성 버전, 본질적으로 녹-아웃(knock-out)을 생성하는데, 이는 녹-인 카세트의 정확한 통합에 의해 "구조"되며, 이는 필수 유전자 코딩 영역을 복구하여, 기능성 유전자 산물이 생산되게 하고 필수 유전자 코딩 서열의 프레임 내에 및 이의 다운스트림에 카고 서열이 위치하게 한다. Strategies, systems, compositions, and methods for efficient production of knock-in cellular clones without reporter genes. An essential gene is targeted using a knock-in cassette that comprises an exogenous coding sequence for a gene product of interest (or "cargo sequence") in frame with and downstream (3′) of an exogenous coding sequence or partial coding sequence of the essential gene. Undesired targeting events create a non-functional version of the essential gene, in essence a knock-out, which is "rescued" by correct integration of the knock-in cassette, which restores the essential gene coding region so that a functional gene product is produced and positions the cargo sequence in frame with and downstream of the essential gene coding sequence.