Vector expressing cytosine base editor without off-target effect without reduction of on-target efficiency in industrial strains and uses thereof

• Main Authors: YU BEEN HEO, HAN MIN WOO
• Format: Patent
• Language: English; Korean
• Published: 29.04.2022
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES USING MICROORGANISMS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The present invention relates to a single base editing composition for early termination of expression of a target gene in Corynebacterium glutamicum, including a vector for expression of a base editor and a vector for expression of a guide RNA, a kit including the composition, Corynebacterium glutamicum strains transformed by the vector, and a method for early terminating expression of a target gene in Corynebacterium glutamicum. According to the present invention, by using improved cytosine deaminase in CRISPR base editing technology, while on-target efficiency of a conventional cytosine deaminase level is maintained, an off-target effect is minimized. As a result, it is possible to overcome limitations of conventional base editing technology and realize high-quality genetic manipulation. Therefore, a single base editing composition of the present invention facilitates production of strains in which cytosine on a targeted specific gene is converted to thymine, and thus, industrial strains, especially Corynebacterium glutamicum, can be utilized in more diverse fields. 본 발명은 염기 편집기 발현용 벡터 및 가이드 RNA 발현용 벡터를 포함하는 코리네박테리움 글루타미쿰에서 목적 유전자의 발현을 조기에 종결시키기 위한 단일 염기 편집용 조성물, 상기 조성물을 포함하는 키트, 상기 벡터에 의해 형질전환된 코리네박테리움 글루타미쿰 균주 및 코리네박테리움 글루타미쿰에서 목적 유전자의 발현을 조기에 종결시키는 방법 등에 관한 것이다. 본 발명에 의하면, 개량된 사이토신 탈아미노화효소를 크리스퍼 염기 편집 기술에 이용하여 기존의 사이토신 탈아미노화효소 수준의 온-타겟 효율은 유지하되, 오프-타겟 효과를 최소화함으로써 기존의 염기 편집 기술이 가지는 한계점을 극복하고 완성도 높은 유전자 조작을 구현할 수 있다. 따라서 본 발명의 단일 염기 편집용 조성물은 목적하는 특정 유전자 상의 사이토신이 타이민으로 전환된 균주의 제작이 용이하도록 하고, 이에 따라 보다 다양한 방면에서 산업 균주, 특히 코리네박테리움 글루타미쿰을 활용할 수 있도록 한다.