무세포 합성으로부터 수득된 폐쇄 말단 DNA 벡터 및 ceDNA 벡터를 수득하는 방법

• Main Authors: ALKAN OZAN, STANTON MATTHEW, KERR DOUGLAS ANTHONY, KOTIN ROBERT MICHAEL, PELLETIER CAROLYN
• Format: Patent
• Language: Korean
• Published: 29.09.2020
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; HUMAN NECESSITIES; HYGIENE; MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

본 출원은 이식유전자의 전달 및 발현을 위해 선형 및 연속 구조를 갖는 DNA 벡터, 특히 폐쇄 말단 DNA 벡터 (예를 들어, ceDNA 벡터)의 합성적 합성 및 무세포 합성을 위한 방법을 기술한다. 본 발명은 폐쇄 말단 DNA 벡터의 시험관내 제조 방법, 상기 방법에 의해 생성된 상응하는 DNA 벡터 산물 및 이의 용도, 및 본 발명의 방법에 유용한 올리고뉴클레오티드 및 키트에 관한 것이다. 본원에 기재된 방법을 사용하여 생성된 DNA 벡터는 세포주, 예를 들어, 박테리아 또는 곤충 세포주에서 생산 동안 도입된 오염물로 인한 원치 않는 부작용이 없다. 또한, 본원의 방법을 사용하여 합성된 ceDNA 벡터를 사용하여,및에서 신뢰할 수 있는 유전자 발현을 위한 방법 및 세포주가 본원에 제공된다. The application describes methods for synthetic synthesis and cell-free synthesis of DNA vectors, particularly closed-ended DNA vectors (e.g., ceDNA vectors) having linear and continuous structure for delivery and expression of a transgene. The present invention relates to an in vitro process for production of closed-ended DNA vectors, corresponding DNA vector products produced by the methods and uses thereof, and oligonucleotides and kits useful in the process of the invention. DNA vectors produced using the methods described herein are free from unwanted side effects due to contaminants introduced during production in cell lines, for example, bacterial or insect cell lines. Further provided herein are methods and cell lines for reliable gene expression in vitro, ex vivo and in vivo using the ceDNA vectors synthesized using the methods herein.