포스포릴 구아니딘 올리고뉴클레오티드를 이용한 템플릿-기반 효소적 DNA 합성 방법 및 그의 이행을 위한 반응 혼합물

• Main Authors: PYSHNYI DMITRII VLADIMIROVICH, STETSENKO DMITRY ALEKSANDROVICH, STEPANOV GRIGORY ALEKSANDROVICH, IVANOV MIKHAIL KONSTANTINOVICH, KUPRYUSHKIN MAXIM SERGEEVICH, DMITRIENKO ELENA VLADIMIROVNA, FILIPENKO MAKSIM LEONIDOVICH, OSCORBIN IGOR PETROVICH, PYSHNAYA INNA ALEKSEEVNA, RICHTER VLADIMIR ALEKSANDROVICH
• Format: Patent
• Language: Korean
• Published: 05.08.2020
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; DERIVATIVES THEREOF; ENZYMOLOGY; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; NUCLEIC ACIDS; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; ORGANIC CHEMISTRY; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; SPIRITS; SUGARS; VINEGAR; WINE

본 발명은 분자 생물학, 생명공학 및 분자 진단 분야에 관한 것이다. 본 발명은 유전적, 바이러스성, 및 기타 질병의 진단을 포함하는 핵산을 검출하는데 사용되는 PCR 및 RT-PCR 시스템의 개발 및 최적화에 사용될 수 있다. 제안된 방법의 본질은 올리고뉴클레오티드의 중성 유도체, 즉 구아니딘 또는 치환된 구아니딘 잔기가 인 원자에 도입된 하나 이상의 인산염 그룹을 포함하는 포스포릴 구아니딘이 폴리머라제 사슬 반응(PCR) 및 역전사와 PCR의 조합(RT-PCR)을 포함하는 템플릿-기반 증폭을 위한 프라이머로 사용된다는 것이다. 본 발명은 PCR 공정에서 보다 신뢰할 수 있고 특이적이며 선택적인 결과를 얻을 수 있게 하며, 특히, 올리고뉴클레오티드 프라이머에서 변형된 인산염 그룹의 위치 및 개수의 서로 다른 조합을 이용하여 DNA 증폭의 부산물의 수율을 감소시킴으로써 PCR의 민감도를 높이고 그리고/또는 의도적으로 억제하는 것을 포함하여 PCR 생성물의 수율을 조절할 수 있다. The invention relates to the field of molecular biology, biotechnology and molecular diagnostics. The invention can be used in the development and optimization of PCR and RT-PCR systems used to detect nucleic acids, including the diagnosis of genetic, viral, and other diseases. The essence of the proposed method is that neutral derivatives of oligonucleotides, namely phosphoryl guanidines containing one or more phosphate groups in which guanidine or substituted guanidine residue is introduced on the phosphorus atom, are used as primers for the template-based amplification, including polymerase chain reaction (PCR) and PCR combined with reverse transcription (RT-PCR). The invention allows to obtain more reliable, specific and selective results in the process of PCR, in particular, to increase the sensitivity of PCR by reducing the yield of by-products of DNA amplification and/or to control the yield of the PCR product, including intentionally suppressing, by using different combinations of the location and number of modified phosphate groups in the oligonucleotide primers.