MICRO-PLATE THERMAL SHIFT ASSAY AND APPARATUS FOR LIGAND DEVELOPMENT AND MULTI-VARIABLE PROTEIN CHEMISTRY OPTIMIZATION

• Main Authors: SALEMME, FRANCIS, R, PETRELLA, EUGENIO, C, BONE, ROGER, F, SPRINGER BARY A, RHIND, ALEXANDER, W, PANTOLIANO, MICHAEL, W
• Format: Patent
• Language: English; Korean
• Published: 25.02.2000
• Edition: 7
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE; CHEMISTRY; COMBINATORIAL CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; COMPOSITIONS THEREOF; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIRCHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES, IN SILICOLIBRARIES; MEASURING; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; ORGANIC CHEMISTRY; PEPTIDES; PERFORMING OPERATIONS; PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL; PHYSICS; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; TESTING; TRANSPORTING; VINEGAR; WINE

PURPOSE: Disclosed is a method for ranking the affinity of each of a multiplicity of different molecules for a target molecule which is capable of denaturing due to a thermal change. CONSTITUTION: The method comprises contacting the target molecule with one molecule of the multiplicity of different molecules in each of a multiplicity of containers; simultaneously heating the multiplicity of containers, measuring in each of the containers a physical change associated with the thermal denaturation of the target molecule resulting from the heating in each of the containers; generating a thermal denaturation curve for the target molecule as a function of temperature for each of the containers and determining a midpoint temperature (Tm) therefrom; comparing the Tm of each of the thermal denaturation curves with the Tm of a thermal denaturation curve obtained for the target molecule in the absence of any of the molecules in the multiplicity of different molecules; and ranking the affinities of the multiplicity of different molecules according to the change in Tm of each of the thermal denaturation curves. 본 발명은 열 변화로 인해 변성될 수 있는 표적 분자에 대해 다수의 상이한 각 분자의 친화도를 평가하는 방법에 관한 것이다. 이 방법은 표적 분자를 각각의 다수 용기에서 다수의 상이한 분자중 하나의 분자와 접촉시키는 단계, 다수의 용기들을 동시에 가열하는 단계, 각각의 용기에서 가열로부터 초래되는 표적 분자의 열 변성과 관련한 물리적 변화를 측정하는 단계, 각 용기에 대해 온도의 함수로서 표적 분자에 대한 열 변성 곡선을 산출하고 그로부터 중점 온도(T)을 결정하는 단계, 각각의 열 변성 곡선의 T을 다수의 상이한 분자중 임의의 분자의 부재하에서 표적 분자에 대해 수득된 열 변성 곡선의 T과 비교하는 단계, 및 각각의 열 변성 곡선의 T의 변화에 따라 다수의 상이한 분자의 친화도를 평가하는 단계를 포함한다. 본 발명은 또한 다수의 샘플을 동시에 가열하는 온도 조정 수단 및 샘플이 가열되는 동안 샘플로부터 분광 방출을 수용하는 수용 수단을 구비하는 분석 장치를 제공한다. 본 발명의 또 다른 양태에서 수용 수단은 형광 방출, 자외광 및 가시광을 수용하도록 구성될 수 있다. 수용 수단은 다양한 방법으로, 예를 들면, 한 번에 하나씩, 하나 이상의 샘플로부터 동시에, 또는 샘플 전부로부터 동시에, 샘플로부터 분광 방출을 수용하도록 구성될 수 있다. 온도 조정 수단은 예정된 프로필에 따라 온도를 변화시키는 온도 제어기를 구비할 수 있다.