NUCLEIC ACID AMPLIFICATION WITH DNA-DEPENDENT RNA POLYMERASE ACTIVITY OF RNA REPLICASES

• Main Authors: KAATHERINE M. MILLER, CHRISTOPHER L. FITT, RICHARD A. MARTINELLI, RANDALL L. DIMOND, JOHN E. MONAHAN, JAMES W. SCHUMM, GEOFFREY R. HUDSON, MARK A. MAFFITT, LEOPOLDO G. MENDOZA, EDWARD E. PAHUSKI, STEVEN J. EKENBERG, JAMES R. HARTNENTT
• Format: Patent
• Language: English; Korean
• Published: 15.11.1999
• Edition: 6
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; COMPOSITIONS THEREOF; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

본 발명은 DNA 분절 및 2'-데옥시리보뉴클레오티드를 포함하고 레플리카제에 의해 자가촉매적으로 복제가능한 RNA의 서열을 갖는 DNA : RNA 키메라 분벌을 비롯한 핵산 분절로 Qβ 레플리카제와 같은 RNA 레플리카제가 DNA-의존성 RNA 폴리머라제("DDRP") 활성을 갖는다는 발견에 기초하여 증폭을 수행하는 방법 빛 이를 위한 킷트에 관한 것이다. 이러한 DDRP 활성의 발견은 RNA 레플리카제에 의해 가자촉매적으로 복제가능한 RNA의 서열을 갖는 DNA 분절과 함께 핵산이 레클리카제에 대한 기질로서 제공되는 본 발명에 의한 핵산 증폭 방법을 제공한다. 이 레플리카제는 상기 DNA 분절로부터 상기 RNA의 합성을 촉매한 후 , 자가 촉매적으로 복제한다. 본 발명은 핵산 프로브 하이브리드화 분석에서와 같이 핵산 검체를 검출하는데 상기 증폭 방법을 사용하는 것을 포함한다. 본 발명의 이러한 분석법은 핵산 검체가 하나 이상의 핵산 프로브와 하이브리드화 하는 것을 포함하며, 이때 상기 프로브는 용이하게 검출가능한 리포터 분자를 풍부하게 제공하기 위해 자가 촉매적으로 복제되는 자가 촉매적으로 복제가능한 RNA를 RNA 레플리카제의 DDRP 활성에 의해 촉매되는 방법으로 생성함함으로써 증폭가능한 DNA 분절을 포함하거나 이 DNA 분절을 생성하기 위해 프로세싱된 것이다. The present invention entails methods and kits for carrying them out based on the discovery that an RNA replicase, such as Qbeta replicase, has DNA-dependent RNA polymerase ("DDRP") activity with nucleic acid segments, including DNA segments and DNA:RNA chimeric segments, which comprise a 2'-deoxyribonucleotide or an analog thereof and which have sequences of RNAs that are autocatalytically replicatable by the replicase.