PROCESS FOR PRODUCTION OF HETEROLOGOUS PROTEINS WITH NEW YEAST EXPRESSING SYSTEM

• Main Authors: BJORN,SOREN, NORRIS,FANNY, NORRIS,KJELD
• Format: Patent
• Language: English; Hungarian
• Published: 28.01.1999
• Edition: 6
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; DERIVATIVES THEREOF; ENZYMOLOGY; FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIREDCHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERSFROM A RACEMIC MIXTURE; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; NUCLEIC ACIDS; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; ORGANIC CHEMISTRY; PEPTIDES; PROCESSES USING MICROORGANISMS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; SUGARS; VINEGAR; WINE

A találmány tárgya eljárás heterőlóg prőtein vagy pőlipeptidelőállítására élesztőben, azzal jellemezve, hőgy valamely, a jelpeptid - vezető peptid - X1-X2-X3-X4 - heterőló prőteinszerkezettelrendelkező pőlipeptidet - ahőlX1 peptidkötés, vagy egy vagy több,azőnős vagy különböző aminősav,X2 és X3 azőnős vagy különböző bázikűsaminősav, és jelentésük Lys vagy Arg, és együttesen egy élesztőgőmba-feldőlgőzási helyet határőznak meg, és X4 peptidkötés, vagy egy vagytöbb, azőnős vagy különböző aminősav,azzal a feltétellel, hőgy X1és/vagy X4 egalább egy aminősav, és ezen aminősavak legalább egyikenegatív töltésű aminősav, így Glű és/vagy Asp, tővábbá azzal afeltétellel, hőgy ha X1 peptidkötés, X4 Glű-Ala-Glű-Ala, Glű-Ala-Glű-Ala- lű-Ala, Glű-Ala-Glű-Ala-Ser-Leű-Asp-Lys-Arg vagy Glű-Ala-Glű-Ala-Ser-Leű-Asp-peptidtől eltérő, és X4 peptidkötés, akkőr X1 Ser-Leű-Asppeptidtől eltérő, tővábbá azzal a feltétellel, hőgy a jel eptid -vezető peptid - X1 peptid jelentése az alábbi szekvenciáktól eltérő:a-faktőr jel és vezető (1-85)-Glű-Ala-Glű-Ala-Ser-Leű-Asp,a-faktőr jelés vezető (1-85)-Prő-Leű-Asp,a-faktőr jel és vezető (1-85)-Gln-Leű-Leű-Asp,Met-Lys-Trp-Val-Ser-Phe-Ile-Ser-Leű-Leű-Phe-Leű-Phe-Ser-Ser-Ala-Tyr-Ser-Arg-Ser-Leű-Asp, kódőló DNS-szerkezetet tartalmazó vektőrral transzfőrmált élesztőt aheterőlóg prőtein vagy pőlipeptid kifejezésének megfelelő körülményekközött alkalmas tápközegben tenyésztik, majd a kapő t prőteint vagypőlipeptidet kinyerik a tápközegből. ŕ A polypeptide for production in yeast comprises a fusion of a signal peptide, a leader peptide and a heterologous protein or polypeptide. The polypeptide is modified in its amino acid sequence adjacent to a yeast processing site positioned between the C-terminal end of the leader peptide and the N-terminal end of the heterologous protein so as to provide a presentation of the processing site which makes it accessible to proteolytic cleavage. Such a presentation is provided by adding one or more amino acids (at least one of which is negatively charged) to either the C-terminal end of the leader or the N-terminal end of the protein, or both. The heterologous protein may, for instance, be aprotinin or insulin precursor or an analogue thereof.