méthode de détection et de quantification par cytométrie en flux des fungi et bactéries contenus dans un solide divisé contenant des matières organiques cellulosiques

• Main Author: DUBERNET, Matthieu, Pierre-Loup, Marie
• Format: Patent
• Language: French
• Published: 31.03.2023
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIRCHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES; MEASURING; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PHYSICS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; TESTING; VINEGAR; WINE

L'invention concerne une méthode de détection et quantification simultanée des fungi et des bactéries présentes dans un solide divisé contenant des matières organiques cellulosiques, selon laquelle on réalise une extraction solide-liquide dudit solide divisé, on introduit un échantillon dudit liquide obtenu, dans un cytomètre en flux et on établit un histogramme bi paramétrique donnant pour chaque point l'intensité de la lumière diffractée et l'intensité de la lumière réfléchie et réfractée de manière à discriminer un premier groupe de points attribuables aux fungi et un deuxième groupe de points attribuables aux bactéries. Selon l'invention, on ajoute dans ledit échantillon avant introduction dans ledit cytomètre, au moins un premier fluorochrome apte à se lier à l'ADN, on excite en outre ledit échantillon de manière à obtenir la fluorescence dudit premier fluorochrome et on établit également ledit histogramme bi paramétrique pour les points correspondant à des particules émettant en fluorescence dans la longueur d'onde d'émission dudit fluorochrome pour le premier groupe de points et pour le deuxième groupe de points, pour chacun desdits groupes on détermine un nuage de points qui correspond à une intensité de fluorescence due au premier fluorochrome supérieure à celle des autres points dudit groupe et éventuellement on compte les points dudit nuage, lesquels correspondent respectivement aux cellules de fungi ou de bactéries. The present invention relates to a method for the simultaneous detection and quantification of fungi and bacteria present in a divided solid containing cellulosic organic matter. According to the invention, to said sample before introducing into said cytometer, at least a first fluorochrome capable of binding to DNA and emitting, following an excitation, in a wavelength equal to or greater than 599 and equal to or greater than 657 nm is added.