Métodos de codificación enzimática para la síntesis eficiente de bibliotecas grandes

• Main Authors: SAMS, Christian Klarner, ANDERSEN, Anne Lee, PEDERSEN, Henrik, HOLTMANN, Anette, FRESKGARD, Per-Ola, NØRREGAARD-MADSEN, Mads, GODSKESEN, Michael Anders, DE LEON, Dean, OLSEN, Eva Kampmann, GOULIAEV, Alex Haahr, KALDOR, Ditte Kievsmose, HUSEMOEN, Gitte Nystrup, FRANCH, Thomas, PETERSEN, Lene, THISTED, Thomas, JENSEN, Kim Birkebæk, FELDING, Jakob, GLAD, Sanne Schrøder, JAKOBSEN, Søren Nyboe, GOLDBECH, Anne, KRONBERG, Tine Titiola Akinleminu, SØRENSEN, Anders Malling, SLØK, Frank Abildgaard, LUNDORF, Mikkel Dybro, NEVE, Søren, HANSEN, Anders Holm, DOLBERG, Johannes
• Format: Patent
• Language: Spanish
• Published: 22.03.2022
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMBINATORIAL CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; COMPOSITIONS THEREOF; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES, IN SILICOLIBRARIES; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

Un método de división y mezclado para sintetizar una biblioteca de diferentes complejos bifuncionales que comprenden una molécula y un oligonucleótido identificador, dicho método comprendiendo los pasos de i) dispensar en una primera ronda de síntesis un oligonucleótido de presentación o un complejo bifuncional naciente en compartimentos separados, ii) exponer cada uno de dichos compartimentos a un reactivo diferente, iii) hacer reaccionar en cada compartimento dicho reactivo diferente con por lo menos un grupo reactivo de un sitio de reacción química en el oligonucleótido de presentación o el complejo bifuncional naciente, iv) añadir en cada compartimento, mediante ligación enzimática o química, una etiqueta oligonucleotídica que identifica dicho reactivo para un oligonucleótido de presentación o un complejo bifuncional naciente, en donde el sustrato para la ligasa está en una forma de cadena doble, en donde el sustrato comprende una pluralidad de etiquetas y por lo menos una o más anti-etiquetas, en donde las etiquetas y la o las antietiquetas están por lo menos parcialmente hibridadas entre sí, en donde las etiquetas están enlazadas covalentemente como resultado de la acción de una enzima que comprende una actividad de ligasa en el sustrato de cadena doble, pero no se enlazan covalentemente antietiquetas como resultado de dicha acción de ligasa, v) mezclar dichos complejos bifuncionales nacientes obtenidos en el paso iv), vi) dispensar dichos complejos bifuncionales nacientes mezclados obtenidos en el paso v) en compartimentos separados, vii) repetir los pasos iii) y iv) para cada compartimento separado en una segunda ronda de síntesis, viii) eliminar dicha por lo menos una o más antietiquetas, y ix) extender por lo menos un cebador y complementar un oligonucleótido identificador de cadena sencilla que comprende una pluralidad de etiquetas oligonucleotídicas enlazadas covalentemente enlazadas a la molécula. Disclosed is a method for obtaining a bifunctional complex comprising a molecule linked to a single stranded identifier oligonucleotide, wherein a nascent bifunctional complex comprising a chemical reaction site and a priming site for enzymatic addition of a tag is a) reacted at the chemical reaction site with one or more reactants, and b) reacted enzymatically at the priming site with one or more tag(s) identifying the reactant(s).