Proteínas de fusión para facilitar la selección de células infectadas con virus vaccinia recombinante de gen de inmunoglobulina específica

• Main Authors: BALCH, Leslie A, MOKSA, Angelika, PARIS, Mark, ZAUDERER, Maurice, PANDINA, Tracy, SMITH, Ernest S, KIRK, Renee
• Format: Patent
• Language: Spanish
• Published: 26.09.2019
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMBINATORIAL CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; COMPOSITIONS THEREOF; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES, IN SILICOLIBRARIES; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; ORGANIC CHEMISTRY; PEPTIDES; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

Una biblioteca de vaccinia recombinante que comprende una biblioteca de polinucleótidos que codifican una pluralidad de polipéptidos de fusión de inmunoglobulina que comprenden diferentes regiones variables de cadena pesada de inmunoglobulina; cada polipéptido de fusión de inmunoglobulina comprende, en orden N- a C-, un dominio variable de cadena pesada fusionado a un dominio constante CH1 fusionado a un segmento polipeptídico que comprende el dominio transmembrana de una proteína de membrana específica de EEV, donde la biblioteca de polinucleótidos se construye en un vector de virus vaccinia y donde cada polinucleótido en la biblioteca comprende los siguientes elementos: (a) un cebador polinucleótido que codifica un cebador segmento polipeptídico que comprende un dominio de cadena pesada IgG CH1; (b) un segundo polinucleótido que codifica un segundo segmento polipeptídico que comprende la región del tallo, el dominio transmembrana y el dominio intracelular de la proteína de membrana específica de EEV del virus vaccinia A56R, situada aguas abajo del cebador polinucleótido que codifica el cebador segmento del polipéptido, y (c) un tercer polinucleótido que codifica una región variable (VH) de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de ella situado aguas arriba del cebador polinucleótido que codifica el cebador segmento polipeptídico; donde la proteína de fusión de inmunoglobulina se puede expresar en la superficie de una partícula de vaccinia EEV y la proteína de fusión se puede combinar con una cadena ligera de inmunoglobulina para formar un dominio de unión al antígeno de una molécula de inmunoglobulina. The present invention relates to a high efficiency method of expressing immunoglobulin molecules in eukaryotic cells. The invention is further drawn to a method of producing immunoglobulin heavy and light chain libraries, particularly using the trimolecular recombination method, for expression in eukaryotic cells. The invention further provides methods of selecting and screening for antigen-specific immunoglobulin molecules, and antigen-specific fragments thereof. The invention also provides kits for producing, screening and selecting antigen-specific immunoglobulin molecules. Finally, the invention provides immunoglobulin molecules, and antigen-specific fragments thereof, produced by the methods provided herein.