Identificación de moléculas que modulan las interacciones proteína-proteína usando reporteros activados por proteasa

• Main Authors: WEISSENSEE, PAUL, EISHINGDRELO, HAIFENG, WRIGHT, PAUL S, CAI, JIDONG
• Format: Patent
• Language: Spanish
• Published: 26.12.2012
• Subjects: INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIRCHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES; MEASURING; PHYSICS; TESTING

Un método para identificar un compuesto que modula una interacción proteína-proteína entre una primera proteína y una segunda proteína, que comprende: i) proporcionar una primera proteína unida a una proteína que activa el reportero dividido o reordenado y una segunda proteína unida a una proteasa, en donde dicha proteína que activa el reportero es una luciferasa, una proteína fluorescente, una peroxidasa, galactosidasa o -lactamasa, en donde dicha proteína que activa el reportero tiene un sitio de escisión para dicha proteasa que está interpuesto entre dos porciones de dicha proteína que activa el reportero, en las que las dos porciones están presenten en un orden reordenado, en donde dicha proteasa es capaz de escindir dicho sitio de escisión en dicha proteína que activa el reportero dando como resultado el rearreglo de dichas dos porciones de dicha proteína que modula el reportero, activando de ese modo dicha proteína que activa el reportero, y en donde la asociación de dicha primera proteína con dicha segunda proteína da como resultado la escisión de dicha proteína que activa el reportero; ii) proporcionar un reportero cuya señal detectable está alterada por la actividad de dicha proteína que activa el reportero; iii) proporcionar dicho compuesto; iv) permitir a dicha proteasa escindir dicho lugar de escisión; y v) monitorizar la señal de reporte; en donde un cambio en la señal del reportero es indicativo de dicha interacción proteína-proteína. Assay methods and systems use enzymatic cleavage resulting from protein-protein interaction to modulate (activate or inactivate) a reporter.