PEPINO MOSAIC VIRUS DETECTION METHOD

• Main Authors: CORDOBA SELLES CARMEN, JORDA GUTIERREZ M. CONCEPCION, GARCIA RANDEZ ANA, CEBRIAN MICO MARIA CARMEN, ALFARO FERNANDEZ ANA, PALLAS BENET VICENTE
• Format: Patent
• Language: English; Spanish
• Published: 11.03.2010
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; DERIVATIVES THEREOF; ENZYMOLOGY; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; NUCLEIC ACIDS; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; ORGANIC CHEMISTRY; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; SPIRITS; SUGARS; VINEGAR; WINE

The invention relates to a method for detecting and identifying PepMV isolates in a plant sample, comprising the following steps: (a) extraction of total RNA from the plant sample (b) analysis of the RNA extracted in step (a) by means of a one-step RT-PCR amplification reaction, said reaction including a mixture containing an oligonucleotide having sequence SEQ ID No1 and an oligonucleotide selected from among the oligonucleotides having sequences SEQ ID No2, SEQ ID No3 and SEQ ID No4 and combinations thereof (c) identification of the amplification products obtained in step (b) (d) digestion with restriction enzymes of the amplification products identified in step (c) and (e) identification of the products of the digestion in step (d). The invention also relates to a kit for carrying out the aforementioned method. Método de detección del virus del mosaico del pepino dulce. La presente invención se refiere a un método para la detección e identificación de aislados del PepMV en una muestra vegetal, basado en las siguientes etapas: a) extracción del ARN total de la muestra vegetal; b) análisis del ARN extraído en a) mediante una reacción de amplificación RT-PCR en un solo paso incluyendo en la reacción una mezcla que comprende un oligonucleótido de secuencia SEQ ID No1 y un oligonucleótido seleccionado entre los oligonucleótidos de secuencia SEQ ID No2, SEQ ID No3, SEQ ID No4 y sus combinaciones; c) identificación de los productos de amplificación obtenidos en b); d) digestión con enzimas de restricción de los productos de amplificación identificados en c); y e) identificación de los productos de la digestión realizada en d). Asimismo, se contempla un kit para llevar a cabo el método descrito.