PROCEDIMIENTO PARA LA AMPLIFICACION SIMULTANEA DE VARIAS SECUENCIAS EN UNA REACCION PCR Y SU MARCAJE

• Main Authors: DISTLER, JURGEN, OLEK, ALEXANDER, BERLIN, KURT
• Format: Patent
• Language: Spanish
• Published: 18.05.2009
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; ENZYMOLOGY; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

Procedimiento para la amplificación de ácidos nucleicos, caracterizado porque se realizan las siguientes etapas: a) se hace reaccionar químicamente una muestra de ácido nucleico con un reactivo, con lo que la 5-metilcitosina permanece intacta y la citosina se transforma en uracilo o en otra base similar al uracilo en el comportamiento de apareamiento de bases; b) hibridan los segmentos a amplificar con al menos dos oligonucleótidos cebadores que presentan dos dominios, de los cuales el dominio específico de secuencia que se encuentra en el extremo 3'' hibrida con el segmento a amplificar, mientras que el dominio genérico que se encuentra en el extremo 5'' no hibrida; c) se lleva a cabo una primera reacción de amplificación mediante una polimerasa, d) hibrida con el producto amplificado un oligonucleótido cebador marcado, que hibrida con el dominio genérico del primer cebador y e) se analiza el producto amplificado respecto a su secuencia, caracterizado además porque el dominio genérico del cebador contiene las nucleobases A, C, G y T, mientras que los dominios específicos de secuencia contienen sólo las bases A, T y C o sólo las bases A, T y G. A method is described for the amplification of nucleic acids, in which the segments to be amplified are first hybridized with at least two primer oligonucleotides that have two domains, wherein the sequence-specific domain found at the 3-end hybridizes to the segment to be amplified, while the generic domain found at the 5-end does not hybridize. Then an amplification reaction is conducted by means of a polymerase and subsequently a labeled primer oligonucleotide, which binds to the generic domain of the first primer, is hybridized to the amplificate which is formed. In the last step, the sequence of the amplificate is investigated.