HUMAN METALLOTHIONEIN-II PROMOTER IN MAMMALIAN EXPRESSION SYSTEM

• Main Authors: COFER, CLAIRE, L, KUSHNER, PETER, J, FRIEDMAN, JEFFREY, S, TALMADGE, KAREN, D
• Format: Patent
• Language: English; French; German
• Published: 15.04.1987
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; ORGANIC CHEMISTRY; PEPTIDES; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

Un système d'expression servant à produire par recombinaison une protéine voulue comprend des cellules d'ovaires de hamsters chinois transformées par une séquence d'ADN contenant la séquence de codage de la protéine voulue et commandée par le promoteur de métallothionéine-II humaine. Les cellules peuvent être conservées dans un milieu dépourvu de sérum et induites en présence d'un médiateur d'induction. De plus, le système peut comprendre un élément auxiliaire et/ou un gène conférant une résistance afin d'obtenir des niveaux accrus d'expression. Le système peut traiter de l'ADN génomique et de l'ADN dépourvu d'introns, et peut produire des protéines qui ont les mêmes caractéristiques que celles des protéines obtenues de sources naturelles. On a ainsi produit une hormone humaine de croissance que l'on ne peut distinguer en rien de celle produite par la pituitaire. L'invention concerne également des systèmes d'expression contenant des gènes de codage de la protéine alvéolaire tensio-active (ASH), des apolipoprotéines AI et AII (apoAI et apoAII), du facteur atrial natriurétique (ANF), de l'erythropoetine (Epo) et de la rénine. An expression system for recombinant production of a desired protein comprises CHO cells transformed with a DNA sequence having the desired protein coding sequence under control of the human metallothionein-II promoter. The cells can be maintained on serum-free medium and induced in the presence of an induction mediator. In addition, the system may include an enhancer element and/or a resistance-conferring gene to provide increased levels of expression. The system can process genomic as well as intronless DNA, and is capable of producing proteins which have the same characteristics as those obtained from native sources. Human growth hormone which is indistinguishable from that produced by the pituitary has been thus produced.