ΜΕΘΟΔΟΣ ΕΠΙ ΤΟΠΟΥ ΥΒΡΙΔΟΠΟΙΗΣΗΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΠΥΡΗΝΙΚΟΥ ΟΞΕΟΣ ΣΤΟΧΟΥ

• Main Authors: SHAH JYOTSNA S, HARRIS NICK S
• Format: Patent
• Language: Greek
• Published: 14.01.2015
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; COMPOSITIONS THEREOF; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; CULTURE MEDIA; DERIVATIVES THEREOF; ENZYMOLOGY; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; NUCLEIC ACIDS; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; ORGANIC CHEMISTRY; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; SUGARS; VINEGAR; WINE

Η παρούσα εφεύρεση παρέχει μία μέθοδο για την ανίχνευση ενός θραύσματος πυρηνικού οξέως στόχου άμεσα από ένα βιολογικό παρασκεύασμα που λαμβάνεται από έναν ασθενή μέσω επί τόπου υβριδοποίησης. Η μέθοδος συνίσταται από αρκετά βήματα τα οποία πραγματοποιούνται σύμφωνα με την καταλογοποιηθείσα σειρά. Ένα δείγμα του βιολογικού παρασκευάσματος εναποτίθεται πάνω σε μία αντικειμενοφόρο πλάκα μικροσκοπίου. Το δείγμα σταθεροποιείται πάνω στην αντικειμενοφόρο πλάκα μικροσκοπίου με σταθεροποιητικό, το δε σταθεροποιητικό περιλαμβάνοντας είτε μεθανόλη-οξικό οξύ σε έναν λόγο από 99:1 έως 80:20, ή φορμόλη-οξικό οξύ σε έναν λόγο από 99:1 έως 80:20. Τα πυρηνικά οξέα του σταθεροποιημένου δείγματος έρχονται σε επαφή με ένα σύμπλοκο ανιχνευτών συγκεκριμένο για το θραύσμα πυρηνικού οξέως στόχο, υπό συνθήκες κατάλληλες για υβριδοποίηση. Το μη-υβριδοποιημένο σύμπλοκο ανιχνευτών εκπλύνεται από το δείγμα. Το εκπλυθέν δείγμα υποβάλλεται σε χρώση με Κυανούν Evans. Το υβριδοποιημένο σύμπλοκο ανιχνευτών ανιχνεύεται οπτικώς μέσω μικροσκοπίας, με την παρουσία του συμπλόκου ανιχνευτών να είναι όντας μία ένδειξη της παρουσίας του θραύσματος πυρηνικού οξέως στόχου. Η μέθοδος μπορεί να πραγματοποιηθεί με διαφορετικά ρυθμιστικά διαλύματα υβριδοποίησης, αρκετά εκ των οποίων αποκαλύπτονται. Η μέθοδος της παρούσας εφεύρεσης είναι χρήσιμη για την ανίχνευση παθογόνων σε ένα βιολογικό παρασκεύασμα. Αποκαλύπτονται συγκεκριμένα σύμπλοκα ανιχνευτών τα οποία είναι χρήσιμα για την ανίχνευση παθογόνων του είδους Μπαμπέσια (Babesia). Η μέθοδος είναι χρήσιμη όσον αφορά την ανίχνευση πυρηνικών οξέων από μία ευρεία ποικιλία βιολογικών παρασκευασμάτων, συμπεριλαμβανομένου του ορού, του The present invention provides a method for detecting a target nucleic acid fragment directly from a specimen obtained from a patient by in situ hybridization. The method is comprised of several steps which are performed in the listed order. A sample of the specimen is deposited onto a slide. The sample is fixed onto the slide with fixative, the fixative comprising either methanol-acetic acid at a ratio of from 99:1 to 80:20, or formalin-acetic acid at a ratio of from 99:1 to 80:20. The nucleic acids of the fixed sample are contacted with a probe complex specific for the target nucleic acid fragment, under conditions appropriate for hybridization. Non-hybridized probe complex is rinsed from the sample. The rinsed sample is stained with Evans Blue. The hybridized probe complex is visually detected by microscopy, with the presence of the probe complex being an indication of the presence of the target nucleic acid fragment. The method can be performed with different hybridization buffers, several of which are disclosed. The method of the present invention is useful for detecting pathogens in a specimen. Specific probe complexes are disclosed which are useful for detecting pathogens of the species Babesia. The method is useful in detecting nucleic acids from a wide variety of specimens, including serum, plasma, sputum, urine, cerebral spinal fluids, tissue, breast milk, and insects such as ticks.