METHOD FOR FURTHER UPSCALING THE LARGE-SCALE PRODUCTION OF THE ONCOLYTIC H-1 PROTOPARVOVIRUS (H-1PV) USING A CARRIER-BASED PRODUCTION PROCESS COMBINED WITH AN OPTIMIZED CELL CULTURE MEDIUM

• Main Authors: WOHLFARTH, DANIEL, VOGEL, MARTIN, LEUCHS, BARBARA, FREHTMAN, VERONIKA, PHAN, LINH MINH PHUC, BRUNECKER, ADRIAN
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 06.04.2023

The present invention provides a method for upstream optimization the large-scale parvovirus production, preferably the oncolytic protoparvovirus H-1 (H-1PV). It is based on microcarriers or macrocarriers and their respective use in suspension or fixed-bed, an optimized cell culture medium, and a medium exchange strategy. In summary, with the optimized cell culture medium and the new medium exchange strategy, the inventors established a reduction in seeded cell density and animal serum, leading to an animal serum-free harvest. The tested carriers are best suited for a high H-1PV yield, cell growth, and bead-to-bead transfer capability, wherein the inventors additionally scaled up the process from 24-well plates to Erlenmeyer, Spinner flask and iCellis nano. As a conclusion, the present invention provides a large-scale method for producing the oncolytic protoparvovirus H-1 with a high virus yield, while lowering production costs and avoiding undesired products of animal origin at the same time. La présente invention concerne un procédé d'optimisation en amont de la production à grande échelle de parvovirus, de préférence le protoparvovirus oncolytique H-1 (H-1PV). Elle repose sur des micro ou macro-vecteurs et leur utilisation respective en suspension ou à lit fixe, un milieu de culture cellulaire optimisé et une stratégie d'échange de milieu. En résumé, grâce au milieu de culture cellulaire optimisé et à la nouvelle stratégie d'échange de milieu, les inventeurs ont établi une réduction de la densité des cellules ensemencées et du sérum animal, conduisant à une récolte sans sérum animal. Les vecteurs testés sont les mieux adaptés à un rendement élevé en H-1PV, à la croissance cellulaire et à la capacité de transfert de bille à bille. Les inventeurs ont en outre étendu le processus des plaques à 24 puits à l'Erlenmeyer, au flacon centrifugeur et à l'iCellis nano. En conclusion, la présente invention apporte un procédé à grande échelle pour produire le protoparvovirus oncolytique H-1 avec un rendement viral élevé, tout en réduisant à la fois les coûts de production et en évitant les produits indésirables d'origine animale.