PRIME EDITOR VARIANTS, CONSTRUCTS, AND METHODS FOR ENHANCING PRIME EDITING EFFICIENCY AND PRECISION

• Main Authors: HUSSMANN, JEFFREY, ADAMSON, BRITTANY, LIU, DAVID R, CHEN, PETER J
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 14.07.2022
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The present disclosure provides compositions and methods for prime editing with improved editing efficiency and/or reduced indel formation by inhibiting the DNA mismatch repair path way while conducting prime editing of a target site. Accordingly, the present disclosure provides a method for editing a nucleic acid molecule by prime editing that involves contacting a nucleic acid molecule with a prime editor, a pegRNA, and an inhibitor of the DNA mismatch repair pathway, thereby installing one or more modifications to the nucleic acid molecule at a target site with increased editing efficiency and/or lower indel formation. The present disclosure further provides polynucleotides for editing a DNA target site by prime editing comprising a nucleic acid sequence encoding a napDNAbp, a polymerase, and an inhibitor of the DNA mismatch repair pathway, wherein the napDNAbp and polymerase is capable in the presence of a pegRNA of installing one or more modifications in the DNA target site with increased editing efficiency and/or lower indel formation. The disclosure further provides, vectors, cells, and kits comprising the compositions and polynucleotides of the disclosure. The present disclosure also provides compositions and methods for prime editing with improved editing efficiency and/or reduced indel formation with modified prime editor fusion proteins. The disclosure further provides, vectors, cells, and kits comprising the compositions and polynucleotides of the disclosure. La présente invention concerne des compositions et des procédés d'édition primaire avec une efficacité d'édition améliorée et/ou une moindre formation d'indel par inhibition de la voie de réparation de mésappariement d'ADN tout en réalisant une édition primaire d'un site cible. En conséquence, la présente invention concerne un procédé d'édition d'une molécule d'acide nucléique par édition primaire qui implique la mise en contact d'une molécule d'acide nucléique avec un éditeur primaire, un ARNpeg, et un inhibiteur de la voie de réparation de mésappariement d'ADN, ce qui permet d'installer une ou plusieurs modifications sur la molécule d'acide nucléique au niveau d'un site cible avec une efficacité d'édition accrue et/ou une moindre formation d'indel. La présente invention concerne en outre des polynucléotides pour l'édition d'un site cible d'ADN par édition primaire comprenant une séquence d'acide nucléique codant un napDNAbp, une polymérase, et un inhibiteur de la voie de réparation de mésappariement d'ADN, le napDNAbp et la polymérase étant capables en présence d'un ARNpeg d'installer une ou plusieurs modifications dans le site cible d'ADN avec une efficacité d'édition accrue et/ou une moindre formation d'indel. La divulgation concerne en outre des vecteurs, des cellules et des kits comprenant les compositions et les polynucléotides de l'invention. La présente invention concerne également des compositions et des procédés d'édition primaire avec une efficacité d'édition améliorée et/ou une moindre formation d'indel avec des protéines de fusion d'éditeur primaire modifiées. La divulgation concerne en outre des vecteurs, des cellules et des kits comprenant les compositions et les polynucléotides de la divulgation.