CATALYTICALLY CONTROLLED SEQUENCING BY SYNTHESIS TO PRODUCE SCARLESS DNA

• Main Authors: PEISAJOVICH, SERGIO, PUGLIESE, KAITLIN, MCDONALD, SETH, MANDELL, JEFFREY
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 06.01.2022
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; ENZYMOLOGY; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The present disclosure relates to methods comprising (a) contacting a polymerase with a template polynucleotide and a plurality of free nucleotides, wherein the template polynucleotide is hybridized to a complementary polynucleotide comprising a 3' end overhung by a 5' terminal fragment of the template polynucleotide, and the plurality of free nucleotides comprise a compound Formula (I); wherein said contacting occurs under a complexation condition, the complexation condition effective to form a complex but not effective to form polymerization, wherein the complex comprises the polymerase, the template polynucleotide, the complementary polynucleotide, and one of the plurality of free nucleotides that is complementary to a first nucleotide of the 5' terminal fragment of the template polynucleotide; (b) detecting a signal from the fluorescent label; and (c) exposing the complex to a polymerization condition. La présente divulgation concerne des procédés comprenant (a) la mise en contact d'une polymérase avec un polynucléotide modèle et une pluralité de nucléotides libres, le polynucléotide modèle étant hybridé à un polynucléotide complémentaire comprenant une extrémité 3' suspendue par un fragment terminal 5' du polynucléotide modèle et la pluralité de nucléotides libres comprenant une formule de composé (I) ; ladite mise en contact se produisant dans un état de complexation, l'état de complexation étant efficace pour former un complexe mais non efficace pour former une polymérisation, le complexe comprenant la polymérase, le polynucléotide modèle, le polynucléotide complémentaire, et l'un de la pluralité de nucléotides libres qui est complémentaire d'un premier nucléotide du fragment terminal 5' du polynucléotide modèle ; (b) la détection d'un signal à partir de l'étiquette fluorescente ; et (c) l'exposition du complexe à une condition de polymérisation.